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質控菌種的保存法有哪些?
發(fā)布時間:2018-09-03瀏覽次數(shù):1641返回列表
不同菌株應采用不同的保藏方法,可選擇使用凍干保藏、利用多孔磁珠 在-70℃保藏、使用液氮保藏或其他有效的保藏方法。那么,質控菌種的保藏方法有哪些呢?
1、長期保存法
(1)低溫冷凍保存法
厭氧菌在低溫條件下新陳代謝處于抑制狀態(tài),不繁殖也不死亡。培養(yǎng)基包括脫纖維羊血、兔血或馬血,20%脫脂牛乳,7.5%葡萄糖的馬血清。
將待保存菌株(培養(yǎng)24-48h)加入上述培養(yǎng)基中,封好瓶口,置-70℃液氮或-70℃低溫冰箱中保存。菌種不同,保存時間也有差異,zui長可保存10年,zui短可保存2年以上。
(2)冷凍真空干燥法
冷凍真空干燥法的培養(yǎng)基(保存劑)有以下2種。10%-20%脫脂牛奶加入0.1%的谷氨酸鈉和0.03%的L-半胱氨酸,煮沸15min消毒,冷卻備用。10%蔗糖與馬血清的混合液,過濾滅菌,并置厭氧環(huán)境中預還原,分裝備用。
將培養(yǎng)基48h左右(處于生長靜止期)的厭氧菌落或菌苔刮下,加入一定量的上述培養(yǎng)基,混勻分裝于安瓿中,置-20℃低溫冰箱中迅速凍結,再放入冷凍干燥機內,抽真空16-24小時,然后將安瓿封口,置4℃環(huán)境下長期保存。
2、短期保存法(1)皰肉培養(yǎng)基保存法:用牛肉渣和牛肉浸出液制成皰肉培養(yǎng)管,接種待保存菌株,然后在液體表面覆蓋1-50px的石蠟,再將培養(yǎng)基垂直放置片刻,待石蠟凝固置35℃培養(yǎng)(無芽孢厭氧培養(yǎng)72h,普通梭菌培養(yǎng)24h,產期莢膜梭菌和多枝梭菌培養(yǎng)2周左右),zui后置室溫或-20℃保存。發(fā)酵糖類的厭氧菌每個月轉種1次,不發(fā)酵糖類的厭氧菌3-6個月轉種1次。
(2)半固體培養(yǎng)基保存法:在上述液體培養(yǎng)基中加入0.2%-0.5%瓊脂,制成半固體培養(yǎng)基,接種時用毛細管將待保存的厭氧菌的菌液加入半固體培養(yǎng)管底,表面加入1-50px厚度的液體石蠟,密封管口,35℃培養(yǎng)48小時,置室溫或-20℃保存。
(3)丙三醇乳劑培養(yǎng)基保存法在厭氧菌液體培養(yǎng)基(含胰蛋白胨、牛肉膏、酵母浸粉、L半胱氨酸和維生素k等)中加入少量牛肉渣分裝于長試管中,接種待保存菌株,置35℃培養(yǎng)48-72h,取出后加入無菌丙三醇(按1:1比例),蓋緊蓋子后用石蠟封口,置4℃或-20℃保存。此法適用于保存脆弱擬桿菌、產黑色素普雷沃菌和具核梭桿菌。


