截止目前，共有28個(gè)省份先后發(fā)生111起非洲豬瘟疫情，生豬撲殺量達(dá)數(shù)萬(wàn)，疫情形勢(shì)復(fù)雜嚴(yán)峻，給生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失!

網(wǎng)友談“豬”色變，到底啥是豬瘟?

顧名思義，“非洲豬瘟”早被發(fā)現(xiàn)并確診是在非洲的肯尼亞，隨后在安哥拉、南非、塞內(nèi)加爾、蘇丹、贊比亞等非洲陸續(xù)有報(bào)道。1957年開(kāi)始在非洲以外的傳播。

非洲豬瘟(African Swine Fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(Asfivirus，ASFV)引起的豬的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病。該病嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)，動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病之一。我國(guó)將非洲豬瘟列為一類動(dòng)物疫病，是烈性外來(lái)疫病，其對(duì)生豬致病率高，致死率高達(dá)。

疫情籠罩，應(yīng)該如何應(yīng)對(duì)?

自2018年8月非洲豬瘟疫情在爆發(fā)以來(lái)，疫情已持續(xù)近6個(gè)月。日前，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部印發(fā)《非洲豬瘟疫情應(yīng)急實(shí)施方案(2019版)》。

眾所周知，接種疫苗是預(yù)防傳染病的有效手段。那么為什么不用疫苗防控非洲豬瘟呢?事實(shí)是目前外均沒(méi)有用于預(yù)防非洲豬瘟的安全有效疫苗。非洲豬瘟疫苗研發(fā)成功短期內(nèi)很難實(shí)現(xiàn)。

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局有關(guān)負(fù)責(zé)人表示，諸多因素共同決定了非洲豬瘟防控工作的復(fù)雜性和長(zhǎng)期性。

從有關(guān)處了解到，現(xiàn)在對(duì)于疫情區(qū)病豬，主要處理方式為撲殺，類似撥牙式消除病毒。一旦檢出陽(yáng)性病豬，無(wú)論大小全部挖坑深埋或者立即焚燒，且嚴(yán)禁運(yùn)出疫區(qū)。健康未染病豬需經(jīng)嚴(yán)格檢測(cè)檢疫，合格后方能逃過(guò)一劫，繼續(xù)飼喂直到達(dá)標(biāo)出售。那么問(wèn)題來(lái)了，怎樣判斷生豬是否感染非洲豬瘟病毒?

非洲豬瘟如何檢測(cè)?

1. 免疫學(xué)檢測(cè)試紙條

2019年1月2日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳發(fā)布關(guān)于非洲豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒有關(guān)事宜的通知。通知規(guī)定可以使用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部部批準(zhǔn)或經(jīng)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心比對(duì)符合要求的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒(試紙條)進(jìn)行豬瘟病毒檢測(cè)。

此法主要原理為抗體與抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，通過(guò)試紙條產(chǎn)生特定顏色變化來(lái)判斷樣本是否具有豬瘟病毒。當(dāng)待檢樣品中沒(méi)有病毒抗體時(shí)，檢測(cè)線則不顯色，有病毒抗體時(shí)，產(chǎn)生顏色。

需要注意的是，試紙條檢測(cè)雖然操作方便、成本低廉、簡(jiǎn)單快速，但敏感性不高，僅為70%，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性和假陰性，一旦漏檢，將導(dǎo)致嚴(yán)重后果，對(duì)于疫情的控制非常不利。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定，符合要求的豬瘟病毒試紙條在應(yīng)急期間可使用至2019年6月30日。顯然，試紙條只是緊急疫情下的權(quán)宜之計(jì)，其準(zhǔn)確性并不能滿足實(shí)際檢測(cè)需求。

2. 常規(guī)PCR檢測(cè)

動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心與動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心于去年8月編制了非洲豬瘟病毒檢測(cè)操作試行規(guī)程。該規(guī)程從分子生物學(xué)角度出發(fā)，針對(duì)非洲豬瘟病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)，主要方式為實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)和常規(guī)PCR檢測(cè)。

常規(guī)PCR檢測(cè)過(guò)程：待檢樣品通過(guò)DNA提取試劑盒提取DNA。反應(yīng)液制備完成后，每管加入提取的3μL DNA樣本，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增完成的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結(jié)束后進(jìn)行拍照觀察分析。此法擴(kuò)增的ASFV VP72基因長(zhǎng)度為257 bp。若被檢樣品電泳凝膠出現(xiàn)257 bp條帶，則判斷為ASFV陽(yáng)性，否則，則視為陰性。

此檢測(cè)方法靈敏度較試紙條檢測(cè)高，兩個(gè)小時(shí)內(nèi)便能出結(jié)果。但是進(jìn)行常規(guī)PCR檢測(cè)需要配備PCR儀，相應(yīng)的，也需要安全無(wú)污染的實(shí)驗(yàn)室條件。另一方面，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物需要進(jìn)行電泳和手動(dòng)熒光成像，后肉眼判斷病毒基因是否具有擴(kuò)增條帶，所以對(duì)檢測(cè)人員的專業(yè)水平要求較高。

3. 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)過(guò)程：待檢樣品通過(guò)DNA提取試劑盒提取DNA。樣本制備完成后，進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。Ct值由實(shí)時(shí)熒光PCR儀軟件自動(dòng)確定。過(guò)程設(shè)置提取陽(yáng)性對(duì)照(+)、提取陰性對(duì)照(-)、反應(yīng)陽(yáng)性對(duì)照(+)、反應(yīng)陰性對(duì)照(-)4個(gè)對(duì)照。

相比常規(guī)PCR檢測(cè)，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)法準(zhǔn)確率高，可達(dá)97%。此法需要配置實(shí)時(shí)熒光PCR儀，這對(duì)中小型養(yǎng)殖場(chǎng)來(lái)說(shuō)，是一筆不小的負(fù)擔(dān)：一方面實(shí)時(shí)熒光PCR儀市場(chǎng)售價(jià)為10萬(wàn)~50萬(wàn)，普通養(yǎng)殖場(chǎng)或檢測(cè)中心難以承此負(fù)擔(dān)；另一方面，實(shí)時(shí)熒光PCR儀操作需要專業(yè)的技術(shù)人員，通常操作人員為本科甚至碩士學(xué)歷，而普通養(yǎng)殖場(chǎng)很難招聘到該類技術(shù)人員。

需要注意的是，盡管花費(fèi)較高，實(shí)時(shí)熒光PCR法仍是目前豬瘟病毒檢測(cè)使用率高的方法。

用戶關(guān)注非洲豬瘟檢測(cè)熒光定量PCR儀的哪些指標(biāo)?

穩(wěn)定性：穩(wěn)定性包括數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，也指性能、指標(biāo)穩(wěn)定。穩(wěn)定性低會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)結(jié)果可靠性下降，這對(duì)于疫情檢測(cè)，尤其是應(yīng)對(duì)大批量樣本檢測(cè)來(lái)說(shuō)，儀器穩(wěn)定性至關(guān)重要。

熒光通道：傾向于采購(gòu)多通道實(shí)時(shí)熒光PCR儀。

價(jià)格：對(duì)于大型養(yǎng)殖場(chǎng)來(lái)說(shuō)，配備PCR儀資金不成問(wèn)題。但中小型生豬養(yǎng)殖場(chǎng)及檢測(cè)機(jī)構(gòu)由于經(jīng)費(fèi)受限，難以承擔(dān)高昂的儀器采購(gòu)費(fèi)用。據(jù)業(yè)內(nèi)人士透露，在其他條件符合預(yù)期的情況下，他們?cè)敢獠少?gòu)10萬(wàn)以內(nèi)PCR儀。

技術(shù)支持：這一點(diǎn)是各型養(yǎng)殖場(chǎng)的軟肋。由于檢測(cè)技術(shù)人員的嚴(yán)重缺失，各生豬養(yǎng)殖場(chǎng)亟需能夠幫助指導(dǎo)生豬檢測(cè)技術(shù)操作。若PCR儀廠商能夠提供專業(yè)的儀器使用指導(dǎo)及售后支持，這將會(huì)是一大賣(mài)點(diǎn)。

因此，價(jià)格明顯的國(guó)產(chǎn)實(shí)時(shí)熒光PCR儀將成為這些用戶的。為此，小編與知名國(guó)產(chǎn)PCR儀供應(yīng)商力新儀器市場(chǎng)經(jīng)理李勇求證，他的回答也印證了這一點(diǎn)。據(jù)他介紹，受此次非洲豬瘟事件的影響，實(shí)時(shí)熒光PCR儀的銷售增長(zhǎng)顯著。

說(shuō)非洲豬瘟檢測(cè)熒光定量PCR儀是應(yīng)對(duì)豬瘟疫情的中流砥柱毫不為過(guò)。然而，即時(shí)、快速和準(zhǔn)確的檢測(cè)是廣大養(yǎng)殖場(chǎng)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)檢測(cè)儀器高的訴求。面對(duì)大規(guī)模爆發(fā)的烈性疫情，用戶對(duì)便攜、易操作、準(zhǔn)確性高、成本相對(duì)低廉的檢測(cè)設(shè)備需求為迫切。換句話說(shuō)，現(xiàn)有儀器解決方案在滿足非洲豬瘟病毒檢測(cè)需求方面還有提升空間。比如前端預(yù)埋試劑的微流控芯片搭配后端qPCR儀檢測(cè)，只要芯片價(jià)格能讓用戶負(fù)擔(dān)得起，將是一個(gè)很好的產(chǎn)品組合。事實(shí)上，以微流控芯片作為耗材，搭配后端定量PCR的檢測(cè)在臨床檢測(cè)領(lǐng)域已有成型產(chǎn)品。希望各大儀器廠商推出優(yōu)檢測(cè)產(chǎn)品，為此次疫情平息出一份力。