古朵生物：elisa實驗原理是什么?

  ELISA實驗原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。

  酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。

  因此，可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

  ELISA實驗步驟及注意事項:

  1、固相載體選擇

  聚苯乙烯：具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。

  聚氯乙烯：聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。

  良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。

  2、包被

  ①板孔的選擇：ELISA級別的微孔板。

  ②抗體選擇：選擇支持ELISA實驗的抗體，根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索適濃度。

  ③包被緩沖液：pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。

  ④包被溫度：2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h。

  ⑤包被濃度：包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。

  3、封閉

  ①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體)。

  ②選擇效果較好的封閉劑(細胞培養(yǎng)級BSA、Tween等)。

  4、加樣及孵育

  ①加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。

  ②孵育的時間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件，建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀，推薦軌道直徑3mm，轉(zhuǎn)速在500±50rpm。

  ③檢測抗體、酶標(biāo)物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴(yán)格根據(jù)說明書提示。

  ④洗板對于ELISA來說，是極其關(guān)鍵的一步，保證ELISA的特異性。

  ⑤封板膜一定要一次一換，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。

  5、顯色和終止

  ①使用前需檢查，底物在加入96孔板之前應(yīng)為無色透明。

  ②顯色底物需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免污染。

  ③孵育時間，說明書上為參考范圍，具體需要根據(jù)實驗條件自行摸索?？蓞⒖紭?biāo)曲濃度大孔的顏色，變?yōu)樗{色較明顯時即可。

  ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。