免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)HE染色的原理

  免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)稱HE染色原理，根據(jù)易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性(neutrophilia)。構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性。

  免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度，pH值升高時(shí)，則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時(shí)，原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝浴?

  免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)所以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

  免疫熒光染色需要注意的知識：

  (1)古朵生物提醒：由于熒光容易淬滅，一般僅能維持幾個(gè)小時(shí)，因此，熒光二抗應(yīng)避光保存，即從加入熒光二抗以后的步驟中都要盡量避光操作。封片后應(yīng)盡早照相，目前有市售的熒光增強(qiáng)劑，可使熒光在4℃保存1-2周仍不淬滅。

  (2) 免疫熒光染色常用的熒光素有以下幾種，綠色熒光：FITC、 Alexa Fluor 488和GFP;紅色熒光：TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和MitoTrackerRed;藍(lán)色熒光：Hoechst、DAPI;黃色熒光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

  (3)陜西依科生物提醒，不同的熒光素激發(fā)的波長不同，因此，選用濾光片時(shí)要注意。一般紫外線的激發(fā)波長為334-365nm，藍(lán)光的激發(fā)波長為435-490nm，綠光的激發(fā)波長為546nm左右。

  (4) 熒光顯微鏡應(yīng)提前至少15min打開汞燈預(yù)熱。關(guān)閉30min后方可再開啟。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。