古朵闡述：多重免疫熒光串色的因素

  隨著TSA試劑盒(酪胺信號(hào)放大技術(shù))的興起，多個(gè)marker的標(biāo)記不再是難題，比如CD4 CD8 CD68 CD56 a-SMA 這幾個(gè)marker的多重免疫熒光組合，能突破傳統(tǒng)方法的限制，實(shí)現(xiàn)這個(gè)組合的同一張切片上的同時(shí)標(biāo)記，但是，要想順利得到理想的結(jié)果，還需要解決一些問題，其中大部分人都會(huì)面臨一個(gè)比較突出的問題：串色。

  出現(xiàn)串色，到底是哪些方面原因?qū)е碌?下面根據(jù)古朵技術(shù)的一些經(jīng)驗(yàn)簡單列舉一下：

  1 染料本身激發(fā)波長發(fā)射波長相隔太近 比如 alexa flour568 和alexa flour 555就很難區(qū)分開 (通過目前的一些成像設(shè)備很難區(qū)分開兩種熒光)

  2 成像設(shè)備的一些局限 比如熒光顯微鏡的濾光片 波長比較近，比如cy3濾光片 和texred或者tritc濾光片 cy5濾光片&CY5.5濾光片 會(huì)有串色

  3 當(dāng)染料本身的問題 以及硬件問題都解決了后 可能還會(huì)出現(xiàn)串色，這個(gè)就屬于染色強(qiáng)度不匹配的問題了，比如綠光 曝光2ms(強(qiáng)信號(hào)) 紅光曝光50ms(弱信號(hào)) 這個(gè)時(shí)候很有可能綠光的信號(hào)會(huì)延伸至紅光

  4  除了以上這些問題 還有可能就是操作失誤導(dǎo)致的串色 比如CD4標(biāo)記后 第二輪修復(fù)時(shí)做CD8指標(biāo)時(shí) 修復(fù)強(qiáng)度不夠(未能將CD4在上一輪形成的 一抗二抗hrp復(fù)合體完全洗脫掉)這個(gè)時(shí)候也有可能形成明顯的串色 比如CD8 除了有真實(shí)的CD8表達(dá) 還會(huì)有一部分CD4 表達(dá) 形成了假陽性CD4(實(shí)為CD8的影子)

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