如何選擇合適的蛋白酶抑制劑！

  即使蛋白酶對(duì)細(xì)胞功能很重要，但你也有不想見(jiàn)到它們的時(shí)候。比如，在純化蛋白質(zhì)的時(shí)候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧，特別是低豐度蛋白。如今，市場(chǎng)上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時(shí)停止蛋白酶的活性。 蛋白酶古朵生物

  為了對(duì)付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前，主要有四種類(lèi)型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名：*蛋白酶、半*蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對(duì)一種蛋白酶，也可以是廣譜的。

  人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類(lèi)型，以及它們可逆或不可逆，對(duì)蛋白酶抑制劑進(jìn)行分類(lèi)。如何選擇和使用?這似乎是一個(gè)難題，光看名字就已經(jīng)讓人頭暈了。下面讓我們來(lái)聽(tīng)聽(tīng)專(zhuān)業(yè)人士的建議。

  蛋白酶抑制劑的選擇，取決于每個(gè)用戶的個(gè)性化實(shí)驗(yàn)，不過(guò)對(duì)于裂解細(xì)胞或勻漿組織的應(yīng)用，抑制劑混合物(或者說(shuō)雞尾酒)通常是個(gè)比較保險(xiǎn)的選擇，可阻斷不同的蛋白酶。Abbexazui的抑制劑就是兩種混合物：Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF;這兩者都適用于裂解液。“它們普遍適用，適合許多樣品，無(wú)論是新鮮還是FFPE組織，抑或不同的物種，”Abbexa的Sabrina Calabressi談道。

  若研究人員希望保留目的蛋白，同時(shí)維持細(xì)胞健康，默克密理博的Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物。她建議選擇針對(duì)四種蛋白酶的抑制劑，如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III。它可抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中的天冬氨酸、半*和*蛋白酶以及氨肽酶。

  有時(shí)，不那么特異的抑制劑似乎是個(gè)好的選擇?！霸诹呀饧?xì)胞或制備組織勻漿液時(shí)，使用具有廣譜特異性的抑制劑，”Mohan說(shuō)。“它們應(yīng)當(dāng)快速反應(yīng)，與蛋白酶不可逆結(jié)合，并在蛋白純化后輕松去除。”

  盡管如此，選擇困難癥還是圍繞著你。Abbexa認(rèn)為，嘗試不同的類(lèi)型是供應(yīng)商的責(zé)任，而不是研究人員的。這家公司建議你和供應(yīng)商交流，讓他們將利用自己的專(zhuān)業(yè)知識(shí)來(lái)幫你選擇。通常，Abbexa在了解研究人員的特定分析、樣品類(lèi)型和應(yīng)用之后，才推薦抑制劑。

  考慮：

  對(duì)于某些類(lèi)型的實(shí)驗(yàn)，你也許要在小的范圍內(nèi)搜索抑制劑。根據(jù)Mohan的建議，你需要先確定阻斷的是哪種類(lèi)型的蛋白酶，然后再選擇合適的抑制劑。因?yàn)椴煌囊种苿┯胁煌淖饔脵C(jī)制。

  “蛋白酶抑制劑可能是可逆的，也可能是不可逆的，它們通過(guò)空間位阻來(lái)防止底物靠近活性位點(diǎn)，”Mohan說(shuō)。其他抑制劑可能通過(guò)修飾蛋白酶活性位點(diǎn)的氨基酸來(lái)發(fā)揮作用?！氨热纾琍MSF可讓*蛋白酶失活，它與活性*發(fā)生反應(yīng)，其中氯甲基酮衍生物與活性位點(diǎn)中的催化三聯(lián)體反應(yīng)，”Mohan談道。

  先廣泛：

  如今，抑制劑用在各種各樣的應(yīng)用中，這也是人們需要謹(jǐn)慎選擇的一個(gè)原因?！跋掠蔚奶幚砗头治觯瑢Q定蛋白酶抑制劑的選擇和使用，”Sigma-Aldrich的市場(chǎng)部Robert Gates談道。例如，他補(bǔ)充說(shuō)，“液相蛋白質(zhì)組分析(如血清)可能需要蛋白酶的立即抑制，因?yàn)樗鼈儠?huì)水解低豐度的目標(biāo)蛋白?！?

  事實(shí)上，目前有這么多類(lèi)型的抑制劑，將它們分門(mén)別類(lèi)還真是很困難。在選擇蛋白酶抑制劑時(shí)，Gates建議從廣泛的開(kāi)始，然后不斷縮小范圍?！?步可能是嘗試預(yù)先配置的雞尾酒，”他說(shuō)?！叭绻鞍姿馊匀淮嬖?，可以采取針對(duì)特定組織和蛋白的方法?！?

  “我們的MS-Safe抑制劑混合物避免了PMSF和AEBSF抑制劑對(duì)蛋白的修飾，也解決了磷酸酶的抑制，”Gates說(shuō)。“在理想情況下，以后我們向樣品中添加一種混合物，就能停止所有的蛋白水解，并且通過(guò)抑制磷酸酶、激酶、糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶的活性，凍結(jié)翻譯后的修飾。”

  我們是否能使用少的抑制劑來(lái)抑制多的蛋白酶，這還有待觀察。不過(guò)，在這么多的選擇中，你肯定能找到一種有效的蛋白酶抑制劑，這是毫無(wú)疑問(wèn)的。

  蛋白酶抑制劑 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。