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古朵生物|Bradford蛋白定量試劑盒
發(fā)布時(shí)間：2022-08-08瀏覽次數(shù)：1186返回列表
產(chǎn)品描述
Bradford蛋白濃度測(cè)定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測(cè)定方法之一。它是根據(jù)Bradford染液（考馬斯亮藍(lán)G-250染料）與蛋白結(jié)合，使染料的大吸收峰從A456變?yōu)锳595，且測(cè)定的吸光值與蛋白濃度成正比關(guān)系的原理設(shè)計(jì)的。本法通過(guò)吸光值，推算蛋白濃度，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的快速性和簡(jiǎn)便性。靈敏度高，比Lowry法大約高四倍，低蛋白檢測(cè)量可達(dá)1μg。測(cè)定速度快、簡(jiǎn)單，僅需一種試劑即可，且不受大多數(shù)樣品中化學(xué)試劑的影響。
古朵生物提供二種規(guī)格的Bradford蛋白濃度檢測(cè)試劑盒，比色皿法分別可做125次和625次。酶標(biāo)法分別可做500次和2500次。
產(chǎn)品組分
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編號(hào) |
組分 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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20202ES76 (500T) |
20202ES86 (2500T) |
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20202-A |
Bradford蛋白染色液 |
125mL |
5×125 mL |
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20202-B |
蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA） |
5×1mL（2mg/mL） |
5×2mL（2mg/mL） |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。
染色液4℃保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品常溫或4℃保存，有效期一年。
注意事項(xiàng)
1）Bradford染色液使用前，應(yīng)充分混勻。同時(shí)，酶標(biāo)儀需預(yù)熱20min。
2）Bradford染色液需恢復(fù)到室溫再使用，有利于提高檢測(cè)的靈敏度。另，使用前需顛倒幾次以充分混勻。
3）由于Bradford染液的顏色反應(yīng)并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關(guān)系，因此每次試驗(yàn)都必須建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。另外，為了得到的結(jié)果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔。
4）Bradford法測(cè)定蛋白濃度對(duì)大多數(shù)化學(xué)物質(zhì)的兼容性比較好，比如對(duì)還原劑DTT的兼容性高達(dá)5mM。但會(huì)受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對(duì)于含去垢劑的樣品，建議使用BCA增強(qiáng)型蛋白定量檢測(cè)試劑盒【貨號(hào)：20201ES76】。
5）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
6）本產(chǎn)品僅作科研用途！
操作方法
一、配制標(biāo)準(zhǔn)品
1. 配制BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系
注：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進(jìn)行稀釋。
BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制可參考表一。
|
Vial |
稀釋液體積(μL) |
2mg/mL BSA體積(μL) |
BSA終濃度(μg/mL) |
|
A |
0 |
100 |
2000 |
|
B |
25 |
75 |
1500 |
|
C |
50 |
50 |
1000 |
|
D |
125 |
75 |
750 |
|
E |
150 |
50 |
500 |
|
F |
350 |
50 |
250 |
|
G |
375 |
25 |
125 |
|
H |
395 |
5 |
25 |
|
I |
400 |
0 |
0=Blank |
二、檢測(cè)方法
A. 標(biāo)準(zhǔn)比色皿檢測(cè)（線性范圍：100-1500μg/mL）
1. 各取20μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中；
2. 加入1mL Bradford染色液，混勻。室溫孵育10min?！咀ⅰ浚簶颖臼覝胤跤龝r(shí)間不可超過(guò)1h；
3. 分光光度計(jì)上測(cè)定595nm處的吸光度，用裝滿(mǎn)水的比色皿對(duì)儀器校零。之后測(cè)定所有樣本濃度。
4. 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-終的OD595nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
B. 標(biāo)準(zhǔn)微孔板檢測(cè)（線性范圍：100-1500μg/ml）
1. 各取5μL各濃度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中；
2. 每孔加入250μL Bradford染色液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時(shí)間不可超過(guò)1h；
3. 酶標(biāo)儀上測(cè)定595nm處的吸光度?；蛘咂渌?75-615nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度，但是相對(duì)于595nm，吸光度會(huì)存在0-10%的損失。
4. 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-終的OD595nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
注：a）由于酶標(biāo)板的光徑比比色皿短，經(jīng)酶標(biāo)板檢測(cè)得到的OD595nm會(huì)低于比色皿檢測(cè)所得，因此可能降低本法的檢測(cè)下限。要得到高的OD595nm，可使用7-10μL標(biāo)準(zhǔn)品/待檢樣本，和250μL Bradford染色液來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。b）如果使用與酶標(biāo)儀相關(guān)的曲線擬合算法（curve fitting algorithm），那么四參數(shù)或者佳擬合曲線可能得到為的結(jié)果，并不是單純的線性擬合。若是手動(dòng)標(biāo)記各點(diǎn)濃度，點(diǎn)-點(diǎn)曲線出來(lái)的結(jié)果于線性擬合。若對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性的要求不是非常嚴(yán)格，可使用線性擬合分析數(shù)據(jù)。
