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單細(xì)胞分離的特點(diǎn)應(yīng)用以及小技巧

發(fā)布時(shí)間:2021-09-06瀏覽次數(shù):915返回列表


  單細(xì)胞分離采用類似噴墨打印機(jī)以及一次性分配分離槽,溫和高效地接種單細(xì)胞,使用明場高分辨率成像或可選熒光分選細(xì)胞,每個單細(xì)胞分離捕獲 5張圖像,單克隆性,提高工作效率,保持并增強(qiáng)細(xì)胞活率,且防止交叉污染。

  采集單細(xì)胞分離的證據(jù),在接種細(xì)胞時(shí)記錄5張連續(xù)圖像,以96或384孔板的形式提供直接的單克隆性圖像證據(jù),提高克隆形成率,與傳統(tǒng)方法相比,在克隆形成率上可實(shí)現(xiàn)高達(dá)8倍的提升。

  保持細(xì)胞健康和無菌,正如克隆生長實(shí)驗(yàn)所見,通過溫和的分離維持細(xì)胞活性,并使用無菌的一次性單向分離槽防止交叉污染,簡便、快速、可選擇以及無損分離單細(xì)胞,簡化遺傳和克隆培養(yǎng)、分析中分離過程??焖俑咝Ы臃N單個活細(xì)胞至微孔板分離系統(tǒng)的主要功能為高效柔和地分離或分選活的單細(xì)胞。該系統(tǒng)通過微流控技術(shù)柔和地形成細(xì)胞液滴,同時(shí)利用白光和熒光成像實(shí)時(shí)分析細(xì)胞數(shù)量和熒光強(qiáng)度,將符合要求的單細(xì)胞液滴準(zhǔn)確接種至96孔板。

  主要特點(diǎn)
  1.分離效率>85%,單細(xì)胞活率>75%;
  2.記錄分離前后的連續(xù)5張圖像,用于支持細(xì)胞株的單克隆性;
  3.采用一次性分離槽,省卻系統(tǒng)的清洗驗(yàn)證,減小交叉污染的風(fēng)險(xiǎn);
  4.采用白光成像和熒光成像,可根據(jù)細(xì)胞直徑、圓度以及熒光強(qiáng)度篩選出感興趣的細(xì)胞;
  5.內(nèi)置除靜電裝置,消除微孔板靜電,確保細(xì)胞液滴接種至微孔正中間,尤其是PCR板。

  單細(xì)胞分離系統(tǒng)可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有限稀釋法,高效地將單個活細(xì)胞接種至微孔板中。得益于分離系統(tǒng)的高效率和高活率,可以將每塊微孔板中可獲得的單克隆細(xì)胞團(tuán)提高至多8塊,從而在相同的工作量下可篩選多的細(xì)胞克隆,從中發(fā)現(xiàn)多優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞株。分離過程中記錄的連續(xù)5張圖像,可以與后續(xù)的孔板成像的圖像證據(jù)互相補(bǔ)充,從而提高單克隆性的可信度。

  應(yīng)用范圍:連接不同管徑大小的毛細(xì)玻璃針,可分離捕獲各種非貼壁狀態(tài)的單細(xì)胞和微粒等,如細(xì)菌、酵母、藻類細(xì)胞、植物花粉、原生動物單細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、血液細(xì)胞、免疫細(xì)胞、卵細(xì)胞、各種懸液中單細(xì)胞及特殊標(biāo)記的單細(xì)胞等。

  單細(xì)胞分離的小技巧
  1. 縮短制備單細(xì)胞懸液的時(shí)間,以保留細(xì)胞活力
  2. 考慮使用細(xì)胞篩來過濾出細(xì)胞團(tuán)塊或雙細(xì)胞
  3. 注意緩沖液的選擇,包括分選和收集溶液
  4. 如果您打算在分選后培養(yǎng)細(xì)胞,請使用對數(shù)生長期的細(xì)胞,并確定佳培養(yǎng)條件
  5. 在分選轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞時(shí),通常在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)進(jìn)行,以提高細(xì)胞群的生存能力
  6. 如果采用熒光抗體來分離稀有細(xì)胞,請?jiān)谌旧半x心抗體,以便去除任何可能被誤認(rèn)為是靶細(xì)胞的熒光顆粒
  7. 對于單細(xì)胞基因組學(xué)應(yīng)用,在分選后別忘了離心平板,以確保細(xì)胞在孔的底部
  8. 選擇一種可靠的分析技術(shù)來評估分選細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)

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