工程細(xì)胞株開發(fā)涉及細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染，單細(xì)胞克隆及單克隆源性驗(yàn)證，蛋白表達(dá)及結(jié)構(gòu)特征篩選及鑒定，蕞終獲得優(yōu)-質(zhì)的細(xì)胞株。

穩(wěn)定細(xì)胞株廣泛用于許多重要的應(yīng)用，包括生物制品（如重組蛋白和單克隆抗體）生產(chǎn)、藥物篩選和基因功能研究。開發(fā)穩(wěn)定細(xì)胞株的過(guò)程通常始于將所需的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至選定的宿主細(xì)胞，一般是 CHO 或 HEK 293 細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后，研究人員隨后篩選和定量分析高表達(dá)的細(xì)胞克隆。

一旦檢測(cè)到這些高產(chǎn)細(xì)胞株，便進(jìn)一步對(duì)這些細(xì)胞和其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。傳統(tǒng)上用于細(xì)胞株開發(fā)的手動(dòng)篩選方法耗時(shí)且需要大量勞力，因此對(duì)于此類工作，存在對(duì)高通量、自動(dòng)化解決方案的巨大需求。

細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及培養(yǎng)基優(yōu)化

細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞株開發(fā)的基礎(chǔ)，無(wú)論是細(xì)胞轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)基優(yōu)化，還是抗體表達(dá)檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)都在細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上完成。細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)長(zhǎng)流程，精細(xì)，耗費(fèi)時(shí)間和人力的流程，定期的細(xì)胞計(jì)數(shù)接種，細(xì)胞換液，細(xì)胞轉(zhuǎn)染等繁瑣的實(shí)驗(yàn)對(duì)工作人員的挑戰(zhàn)極大，且在高通量的人工操作中易帶入污染而導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)及篩選的失敗。高通量、標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的細(xì)胞培養(yǎng)能幫助我們?cè)讷@得geng準(zhǔn)-確的結(jié)果的同時(shí)加速細(xì)胞株開發(fā)進(jìn)度。

01、透射光細(xì)胞計(jì)數(shù)（無(wú)標(biāo)記計(jì)數(shù)法）

透射光分割（分析）算法提高了不同細(xì)胞類型計(jì)數(shù)的準(zhǔn)-確性，通常用于對(duì)未染色的活細(xì)胞或固定細(xì)胞進(jìn)行成像。另外還有使用熒光方法檢測(cè)細(xì)胞核或細(xì)胞體的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞計(jì)數(shù)方法。

02、圖像細(xì)胞計(jì)數(shù)法

圖像細(xì)胞計(jì)數(shù)法是一種將低倍率顯微鏡與成像和分析工具相結(jié)合的細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)。圖像細(xì)胞計(jì)數(shù)法有助于在單次檢測(cè)中提供關(guān)于大量細(xì)胞的細(xì)胞特性信息。圖像細(xì)胞計(jì)數(shù)法可用于無(wú)標(biāo)記或熒光標(biāo)記細(xì)胞，可對(duì)一個(gè)細(xì)胞群多次執(zhí)行，以隨時(shí)提供關(guān)于細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的信息。

03、活細(xì)胞成像

活細(xì)胞成像是通過(guò)顯微觀察研究活細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。它可以實(shí)時(shí)顯示和定量細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。活細(xì)胞成像包含多種方向和生物應(yīng)用 — 無(wú)論是對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)-期動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，還是進(jìn)行熒光標(biāo)記。

04、如何計(jì)算轉(zhuǎn)染效率

在使用轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株進(jìn)行特定檢測(cè)前，測(cè)量轉(zhuǎn)染效率可為研究人員提供基因編輯產(chǎn)率的早期指示。使用透射光或能體現(xiàn)轉(zhuǎn)染的熒光通道均可獲得高質(zhì)量圖像。圖像分析軟件可識(shí)別每個(gè)細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，判斷細(xì)胞是否為 GFP 陽(yáng)性。然后，可以根據(jù)比值來(lái)計(jì)算轉(zhuǎn)染效率。

05、支原體檢測(cè)

支原體是蕞小且蕞簡(jiǎn)單的原核生物，也是細(xì)胞培養(yǎng)物中常見的污染物。支原體污染的征兆包括增殖率降低以及基因表達(dá)等細(xì)胞反應(yīng)變化。

細(xì)胞株鑒定

工程細(xì)胞株開發(fā)的主要目的是通過(guò)高通量篩選手段獲得數(shù)株高產(chǎn)穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，為后續(xù)的工藝開發(fā)及優(yōu)化提供基礎(chǔ)。細(xì)胞株鑒定是對(duì)細(xì)胞株的表達(dá)量，表達(dá)抗體的生物活性、糖型結(jié)構(gòu)等多種指標(biāo)進(jìn)行高通量篩選，通過(guò)綜合評(píng)估及分析篩選出候選細(xì)胞株。

細(xì)胞株鑒定的方法決定了細(xì)胞株開發(fā)的效率和效果，穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)的篩選方法讓我們能獲得geng準(zhǔn)-確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其決定了篩選的效果，而高通量快速的檢測(cè)手段決定了篩選的效率，讓我們geng快的篩選到目的細(xì)胞株