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古朵生物:免疫熒光技術(shù)兩種檢測方法
發(fā)布時(shí)間：2019-08-19瀏覽次數(shù)：1188返回列表
免疫熒光技術(shù)有兩種檢測方法：用熒光標(biāo)記抗體示蹤或檢測相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光標(biāo)記抗原示蹤或檢測相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。其中以熒光抗體方法較常用。
A：1.根據(jù)抗原選擇合適的抗體：確認(rèn)抗原可以識(shí)別哪一種異構(gòu)體以及抗原表位的位置。2. 確認(rèn)您的目的蛋白在該樣本中是否表達(dá)（這里需要用到陽性對(duì)照）。3. 根據(jù)您所要研究的目標(biāo)蛋白來確定合適的樣本類型（石蠟切片、冰凍切片還是細(xì)胞制備物等）。4.選擇抗體時(shí)需要考慮該抗體的物種交叉反應(yīng)；5. 關(guān)于蛋白，您需要考慮它的組織定位和細(xì)胞定位，以及染色時(shí)是否應(yīng)該有信號(hào)。6.選擇合適的固定方法及抗原修復(fù)方法。7.抗體的工作濃度或稀釋比例，以及抗體的物種來源也是需要考慮的重要因素。
對(duì)于某些特殊試驗(yàn)樣品，比如腦，我們需要確保細(xì)胞的滲透性，讓化合物能真正進(jìn)入細(xì)胞或血腦屏障。另外需要確保所使用的化學(xué)品能夠溶于合適的溶劑。還有確定*適合的給藥途徑（注射或口服）。完成上述所有步驟之后，您就可以獲取組織或細(xì)胞樣品了。
A：對(duì)于細(xì)胞制備物，它們常見的形式是涂片或培養(yǎng)的細(xì)胞系。對(duì)于組織樣本，*常用的是石蠟包埋的組織切片，福爾馬林固定。原因是它們能夠保持組織形態(tài)與蛋白抗原性之間的*佳平衡。石蠟包埋的組織切片很穩(wěn)定，并且易于使用。但它的不足之處是很耗時(shí)（需要對(duì)切片進(jìn)行脫蠟處理和抗原修復(fù)）。一般來說，石蠟切片適用于 4 微米厚的切片。如果切片厚度大于4微米，抗體可能會(huì)被困住，導(dǎo)致假陽性染色，這是我們需要避免的。
