石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒等RNA提取純化產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒
英文名稱：Total RNA Extraction Kit from Paraffin Embedded Tissues
產品貨號：WH0058
產品規(guī)格：50次

本試劑盒可從福爾馬林固定石蠟包埋組織切片（以下簡稱FFPE)中提取總RNA。由于固定和包埋的條件限制，FFPE樣本核酸通常發(fā)生片段化并且會被甲醛化學修飾，因此較難提取，本試劑盒提取的RNA可應用于RT-PCR等下游試驗。

產品應用：
·采用硅基質膜柱法純化方式，在可能的程度內獲得的總RNA純度更高、信息更為完整。
·相對于傳統方法，操作更為簡便、快捷。
·適用于下游的RT-PCR或RT-qPCR等實驗檢測。

提取實例：

上圖為本試劑盒提取大鼠肝臟石蠟包埋切片樣本總RNA，用50μl RNase-free ddH2O洗脫后，取8μl上樣，1%瓊脂糖凝膠，6V/cm電泳20min。起始量：約15mg組織。

試劑盒組成：

組分	50T
裂解液RF	12ml
緩沖液RB	12ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	12ml
Proteinase K	500μl
RNase-Free ddH2O（瓶裝）	40ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管）	50套
DNase I	1500U
緩沖液RDD	4ml
RNase-Free ddH2O（管裝）	1ml
RNase-Free離心管（1.5ml）	50個

儲存條件：室溫（15-25℃)保存。DNase I，緩沖液RDD和RNase-Free ddH2O（管裝)置于2-8℃保存。

自備試劑：二甲苯、無水乙醇

使用前注意事項：
1．次使用前應在漂洗液RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標簽。
2．DNase I儲存液的配制：將DNase I干粉（1500U）溶解在550μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9個月）。
注意：從-20℃融化后的DNase I儲存液保存于4℃（可保存6周），不要再次凍存。

起始材料：
1．標準的福爾馬林固定石蠟包埋程序也常常會造成核酸的片段化。為了盡量降低RNA片段化的可能性,應該按照以下操作步驟進行樣本處理：
·組織切除后應盡快浸入4%-10%的福爾馬林溶液中；
·固定時間zuì好為14-24h（固定時間過長會導致RNA片段化更嚴重,不利于下游的試驗；
·樣本包被之前必須徹底脫水。
2．應采用新鮮的FFPE組織切片,切片厚度不超過10μm，切片過厚可能會造成RNA得率低，每次制備采用的切片數應不超過8片，表面積應不超過250mm2。
3．如果沒有起始樣本的信息，建議初次制備采用的切片數應不超過2片，然后根據RNA的得率和純度，下次制備采用的切片數可以進行調整，但應不超過8片。

操作步驟：
1．將石蠟樣品切成5-10μm厚的片狀。
注意：如果樣品表面暴露于空氣中,zuì初的2~3片棄掉不用。
2．迅速將2-8張切片置于1.5ml RNase-Free的離心管中，加入1 ml二甲苯，劇烈渦旋10 sec。
3．室溫（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)離心2min。
4．用槍頭吸除上清，小心不要吸到沉淀。
5．加入1 ml無水乙醇于沉淀中，渦旋混勻。
6．室溫（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)離心2min。
7．用槍頭吸除上清，小心不要吸到沉淀（用一個新的槍頭小心吸出殘余的乙醇）。
8．打開管蓋，室溫（15-25℃)或37℃放置10 min直至殘余的乙醇揮發(fā)完全。
  注意：完全去除殘余的乙醇很重要，殘余的乙醇會對RNA產生影響。
9．加入200 μl裂解液RF以及10 μl Proteinase K于沉淀中，徹底渦旋混勻。
10．55℃孵育15 min之后80℃孵育15 min。
11．室溫（15-25℃)，12000rpm（~13400×g)離心5 min，轉移上清入新的RNase-Free離心管中。
12．加入220 μl的緩沖液RB，渦旋混勻。
13．加入660 μl的無水乙醇，渦旋混勻（可能會出現沉淀)。
14．轉移700 μl溶液和沉淀入吸附柱CR3中（吸附柱放在收集管中），12000rpm（~13400×g)離心1 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
15．重復步驟14，直到所有的溶液和沉淀完全通過吸附柱CR3，棄廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
16．DNase I工作液的配制：取10 μl DNase I儲存液放入新的RNase-Free離心管中，加入70 μl RDD溶液，輕柔混勻。
17．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室溫放置15 min。
18．向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RW1，室溫（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)離心30-60 sec，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。
19．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），室溫靜置2min，12000rpm（~13400×g)離心30-60 sec，棄廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
20．重復步驟19。
21．室溫（15-25℃)，12000rpm（~13400×g)離心2min，倒掉廢液。將吸附柱CR3置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：此步驟目的是將吸附柱CR3中殘余的漂洗液去除，漂洗液的殘留，可能會影響后續(xù)的RT等實驗。
22．將吸附柱CR3轉入一個新的RNase-Free離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置2min，12000rpm（~13400×g)離心2min，得到RNA溶液。
  注意：洗脫緩沖液體積不應少于30 μl，體積過小影響回收效率。RNA溶液請于-70℃保存。配置膠用RNA專用系統。

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名稱：昆蟲RNA柱式提取試劑盒
貨號：BTN81220
規(guī)格：50次
本試劑盒是專門用于從富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的動物樣品(尤其是昆蟲樣品)中提取總RNA的試劑。

試劑盒特點：
1. 操作簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。
2. RNA純度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數昆蟲中的多糖污染。
3.適用于各種昆蟲組織，每100mg組織能提取到20-30μg 總RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實驗。
5.一站式，提供RNase-free的樣品收集管。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存(RNA洗脫液zuì好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 將50-300mg昆蟲組織放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
2. 將勻漿物或硯磨物轉移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉移非液體的細胞碎片)。
3.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備lǜ仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
4.室溫12000 rmp離心3～5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機相和中間層含有DNA、蛋白質和其他雜質，避免觸及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
7. 將一半的溶液轉移到離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液轉移到同一離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室溫12000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室溫12000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
11.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
12. 將離心吸附柱轉移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 12000 rmp室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆蟲的28S RNA被切割成兩個小的片段，彼此用氫鍵相連，所以在甲醛變性膠中，沒有28S帶出現(文獻見：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA產量產率測定：將5-10μl RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出RNA的產量(濃度X體積)和產率(RNA產量/組織用量)。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關)，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染，但一般不影響RT-PCR等反應。

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