非洲豬瘟病毒是高品質(zhì)的動物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，我公司的非洲豬瘟病毒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括非洲豬瘟病毒(ASFV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：非洲豬瘟病毒(ASFV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA421
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒|96次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對非洲豬瘟病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對非洲豬瘟的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染動物的病原學(xué)診斷。

二、用途：
本試劑盒適用于動物病料、鼻咽拭子、血液等樣本中非洲豬瘟病毒的特異檢測。適用于非洲豬瘟病毒感染的輔助診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。zuì低檢測限：500copies/mL，穩(wěn)定性：批內(nèi)及批間差異系數(shù)≤3% 。

三、試劑盒組成：(48T)
小盒(擴(kuò)增試劑盒)

組份	數(shù)量	規(guī)格
非洲豬瘟病毒熒光qPCR反應(yīng)液(ASFV-qPCR MIX)	1管	672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
陽性對照(ASFV-PTC)	1管	50μL/管

大盒(提取試劑盒)

組份	規(guī)格	數(shù)量
FD1試劑	15mL/瓶	1瓶
FD2試劑	500μL/管	1管
FD3試劑	15mL/瓶	1瓶
FD4試劑	30mL/瓶	1瓶
FD5試劑	2mL/管	2管
吸附柱及收集管	48套/包	1包

四、儲存條件及有效期
小盒于-20℃以下保存，有效期為6個月；大盒室溫避光保存，有效期12個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-80℃，但不能超過6個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機(jī)，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管中備用。
6.1.2 血漿：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管中備用。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水，劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無DNA酶污染的離心管中備用。
6.1.4 病灶組織樣品：稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中備用。
6.2 DNA提取
請查看配套提取試劑盒說明書
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應(yīng)液(ASFV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個反應(yīng)加入的量	N個反應(yīng)加入的量
ASFV反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設(shè)定的N 個PCR 反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(PTC)5μL，10000rpm 瞬時離心10 秒。
向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(ASFV-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件:

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1)陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2)陽性對照(ASFV-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3)以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(2)在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明ASFV核酸陽性。
(2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明ASFV核酸陰性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4)對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行ASFV qPCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明ASFV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)
(1)初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
(3)PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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