夏天的午后，下雷陣雨是常有的事?；鸺t的太陽(yáng)逼得天地之間氣息奄奄，終于天庭也發(fā)怒了，他讓雷公電母施展一下驚天神威。即刻，雷公電母操起武器，站在施法臺(tái)上念咒施法。瞬間，天空烏云密布，黑沉沉的兩朵烏云猛然碰撞，天空出現(xiàn)一道利劍般的閃電，好像要把天空劈成碎片。閃電過(guò)后，雷公閃亮登場(chǎng)，只一會(huì)兒工夫，天地馬上變了樣，電閃雷鳴，風(fēng)雨交加。這會(huì)兒，太陽(yáng)再怎么狂妄也招架不住了，只好灰溜溜地暫時(shí)躲到烏云背后去了。接下來(lái)介紹細(xì)菌的培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基的配……
原理
在基因工程實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，細(xì)菌是不可缺少的實(shí)驗(yàn)材料。質(zhì)粒的保存、增殖和轉(zhuǎn)化；基因文庫(kù)的建立等都離不開(kāi)細(xì)菌。特別是常用的大腸桿菌。
實(shí)驗(yàn)材料、試劑與主要儀器
（一） 實(shí)驗(yàn)材料
大腸桿菌
（二） 試劑
1、胰蛋白胨
2、酵母提取物
3、氯化鈉
4、1mol/
5、瓊脂粉
6、抗生素（氨芐青霉素、卡那霉素等）
（三）儀器
1、培養(yǎng)皿
2、帶帽試管
3、涂布器
4、滅菌鍋
5、無(wú)菌操作臺(tái)（含酒精燈、接種環(huán)、滅菌牙簽等）
6、恒溫?fù)u床
四、操作步驟
（一）LB培養(yǎng)基的配制
配制每升培養(yǎng)基，應(yīng)在950m1去離子水中加入：
細(xì)菌培養(yǎng)用胰蛋白胨 10g
細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物 5g
搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)完全溶解，用1mol/L 調(diào)節(jié)pH位至7.0。加入去離子水至總體積為in2 (1.034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min，即為L(zhǎng)B液體培養(yǎng)基。
LB固體培養(yǎng)基是在其液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上另加瓊脂粉15g/L。
（二）細(xì)菌的培養(yǎng)
（１）在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)
1、過(guò)夜培養(yǎng)
⑴取5ml液體培養(yǎng)基加入一只無(wú)菌的試管中。
⑵用接種環(huán)或滅菌牙簽挑一個(gè)單菌落，接種于培養(yǎng)液中。
⑶蓋好試管，在搖床上以60r/min速度，于37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
２、大體積培養(yǎng)
⑴按1∶100的比例將過(guò)夜培養(yǎng)物加入到一無(wú)菌燒瓶中，燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。
⑵于37℃，約300r/min劇烈搖動(dòng)培養(yǎng)。
（２）在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)主要是為了獲得單菌落和短期保存。
平板劃線法分離單菌落
⑴采用無(wú)菌技術(shù)，用接種環(huán)將接種物從平板的一側(cè)開(kāi)始劃線。
⑵重新消毒接種環(huán)，從一劃線處將樣品劃線至平板的其余部分，重復(fù)劃線直至覆蓋整個(gè)平板。
⑶于37℃培養(yǎng)直至長(zhǎng)出單菌落。
