產(chǎn)品名稱:一鏈cDNA合成試劑盒

英文名稱:RT EasyTM（For first-strand cDNA synthesis）

產(chǎn)品規(guī)格:25 rxns 100 rxns

產(chǎn)品貨號:RT-01011

保存說明:短期室溫，長期2-8℃

產(chǎn)品描述:用于長cDNA合成或者客戶特定引物RT反應(yīng)

英文名稱:RT EasyTM（First-strand cDNA for Real Time PCR）

產(chǎn)品規(guī)格:50 rxns 200 rxns

產(chǎn)品貨號:RT-01021

產(chǎn)品描述:一鏈合成，添加2種引物，用于Real Time PCR

一鏈cDNA合成試劑盒 注意事項(xiàng):

1、確保RNA完整性及純度。RNA質(zhì)量是決定合成cDNA一鏈成功的關(guān)鍵因素,其純度及完整性可由OD260/OD280比值和進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。較純的RNA樣品OD260/OD280比值通常為1.8-2.0,若該比值偏低,應(yīng)進(jìn)一步純化。真核生物RNA樣品電泳圖譜28s和18s的比值約為2:1,否則,表明有RNA降解。

2、避免RNA酶污染。進(jìn)行cDNA合成所用的器皿、試劑和溶液必須完全無菌。操作過程始終戴手套以杜各種RNA酶的污染。

3、 合成cDNA一鏈的引物選擇。選擇oligo(dT)12-18作為反轉(zhuǎn)錄引物,可保證cDNA具有完整的3’-端,通?？傻玫浇咏L的cDNA一鏈;若選擇隨機(jī)寡核苷酸(dN)6或(dN)9作為引物,引物在整個mRNA的多個位點(diǎn)退火,產(chǎn)生短的部分長度的cDNA一鏈。這種方法經(jīng)常用于獲得5’末端序列及從帶有二級結(jié)構(gòu)區(qū)域或帶有逆轉(zhuǎn)錄酶不能復(fù)制的終止位點(diǎn)的RNA模板獲得cDNA。

一鏈cDNA合成試劑盒 操作方法:

1、 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

(1) 在無菌薄壁管中加入以下成份:

Total RNA   0.5-1.0μg

(dN)9 or oligo(dT)18  100pmol

(2) 混勻后,70℃變性5min,將薄壁管迅速置于冰上冷卻,然后依次加入以下成份:

5×M-MLV Buffer 4μl

dNTPs(10mM each) 1μl

RNasin 10U

100mM DTT 2μl

M-MLV Reverse Transcriptase 100U

DEPC-treated water up to 20μl

（3） 混勻后短暫離心，使用oligo(dT)18引物時在42℃，使用隨機(jī)引物(dN)9時在37℃下溫育1小時。

(4) 94℃ 5min終止反應(yīng)后,冰上冷卻。

(5) 合成的cDNA一鏈可直接用于PCR擴(kuò)增或進(jìn)行其它下游操作。