TRIzol一步法總RNA提取試劑簡介 :

TRIzol 是一種總 RNA 抽提試劑，可以直接從細(xì)胞或組織中提取總 RNA 。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞并抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。

TRIzol 在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持 RNA 的完整性，因此對(duì)純化 DNA 及標(biāo)準(zhǔn)化 RNA 的生產(chǎn)十分有用。

TRIzol一步法總RNA提取試劑的成分 :

TRIzol 的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì)，但不能完全抑制 RNA 酶活性，因此 TRIzol 中還加入了 8 －羥基喹啉、異硫氰酸胍、 β- 巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源 RNase （ RNA 酶）。

　　 ※ 0.1% 的 8 －羥基喹啉可以抑制 RNase ，與氯仿聯(lián)合使用可增強(qiáng)抑制作用。

　　 ※ 異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)消失，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)降解，核蛋白迅速與核酸分離。

　　 ※ β- 巰基乙醇的主要作用是破壞 RNase 蛋白質(zhì)中的二硫鍵。

TRIzol一步法總RNA提取試劑的使用方法 :

　　用勻漿器將組織磨碎，加入 TRIzol 處理組織。 5 分鐘后加入氯仿，以每分鐘 12000 轉(zhuǎn)離心 5 分鐘，樣品即分成水樣層、中間層和有機(jī)層。

　　 ※ RNA 存在于水樣層中，收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀 RNA 來還原。

　　 ※ 在除去水樣層后，有機(jī)層中的 DNA 和蛋白質(zhì)也能相繼以沉淀的方式還原：乙醇能使中間層的 DNA 沉淀析出，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質(zhì)。

　　每 100ml TRIzol 可以抽提 100 個(gè)六孔板中的樣品或 100 個(gè) 50-80mg 的組織樣品。無論樣品是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織，該方法對(duì)少量的組織 (50-100mg) 和細(xì)胞 ( 約五百萬個(gè) ) 及大量的組織 (≥1g) 和細(xì)胞 ( 超過一千萬個(gè) ) 均有較好的分離效果。

　　每一百萬細(xì)胞用 TRIzol 抽提可得 5-15 微克 RNA ，每毫克組織用 TRIzol 抽提可得 1-10 微克 RNA （產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異）。

　　 TRIzol 操作上的簡便性允許其同時(shí)處理多個(gè)樣品，所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。

　　 TRIzol 抽提的總 RNA 能夠避免 DNA 和蛋白質(zhì)的污染，故而能夠作 RNA 印跡分析、斑點(diǎn)雜交、 poly(A)+ 選擇、體外翻譯、 RNA 酶保護(hù)分析和單分子克?。?PCR ）。

　　 ※ 如果是用于 PCR ，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時(shí)，建議用級(jí)聯(lián)擴(kuò)大的 DNase I(Cat. No. 18068) 來處理抽提的總 RNA 。

　　 ※ TRIzol 試劑能促進(jìn)不同種屬、不同分子量大小的多種 RNA 的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的 RNA 經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于 7kb 和 15kb 之間的不連續(xù)的高分子量條帶（ mRNA 和 hnRNA 成分），兩條核糖體 RNA 條帶位于 ~5 kb (28S) 和 ~2 kb (18S) ，低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3kb 之間 (tRNA, 5S) 。當(dāng)抽提的 RNA 用 TE 稀釋時(shí)，其 A260/A280 比值 ≥1.8 。抽提小 RNA 時(shí)宜 -70 ℃ 沉淀過夜。

　　 TRIzol 對(duì)人體有害，使用時(shí)應(yīng)戴一次性手套，注意防止濺出。

acterial Enhancement Reagent. Store at 2°C to 8°C.