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人膀胱癌細胞系其對膀胱癌轉(zhuǎn)移機制和診療的研究有著重要意義,為實驗研究提供了合適的研究材料。對其耐藥機制進行初步探討。

細胞凍存方法：

1.選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。

2.去上清液，加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為3×106～1×107/mL之間。

3.將上述細胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤?，安瓿裝1～1.5mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記（日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù)）。

4.將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi)；置于液氮容器頸口處存放隔夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入4℃冰箱中2～3小時，再移至冰箱冷凍室內(nèi)3～4小時（此步可省略），再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時，后沉入液氮中。

細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

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培養(yǎng)細胞生長過程：潛伏期→指數(shù)增生期→停滯期

細胞貼壁后經(jīng)過一個潛伏階段，才進入生長和增殖期.原代培養(yǎng)細胞潛伏期，約24-96 小時或更長, 連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期短，僅需6-24 小時。

指數(shù)增生期(logarithmic growth phase)這是細胞增殖旺盛的階段，分裂相細胞增多。指數(shù)增生期細胞分裂相數(shù)量可作為判定細胞生長是否旺盛的一個重要標(biāo)志。一般細胞的分裂指數(shù)介于0.1%-0.5%，原代細胞分裂指數(shù)較低，而連續(xù)細胞和腫瘤細胞分裂相指數(shù)可高達3%－5%。

細胞數(shù)量達到飽和密度后，如不及時進行傳代，細胞就會停止增殖，進入停止期停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動。如不進行分離傳代，細胞會因培養(yǎng)液中營養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH 下降等因素中毒，出現(xiàn)形態(tài)改變，貼壁細胞會脫落，嚴重的會發(fā)生死亡，因此，應(yīng)及時傳代。

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