zui近，小編的細胞總是處于無休止的污染，污染，復(fù)蘇和再污染的循環(huán)中。

我相信有一個以上的童鞋有這樣的麻煩，所以今天我們將討論細胞污染的問題。

先，您需要知道什么是細胞污染 - 任何對細胞生長有害的成分或?qū)е录毎患兊漠愇锒急灰暈槲廴?。根?jù)污染源，細胞污染可分為化學(xué)污染，物理污染和生物污染。

一是化學(xué)污染

用于細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌。其中，血清是細胞培養(yǎng)中常用的培養(yǎng)基，血清中存在潛在的化學(xué)污染。此外，血清成分不確定，血清對不同細胞的生長有不同的影響，包括毒副作用。

二是物理污染

物理污染主要是指通過溫度，振動，輻射和輻射等物理因素破壞細胞。細胞培養(yǎng)基等暴露于輻射或紫外光引起細胞代謝的改變。

恒溫培養(yǎng)箱周圍有設(shè)備產(chǎn)生機械振動，也可能對細胞生長有影響。

三，微生物污染（這是我們經(jīng)常遇到的）

細菌：

常見的污染物之一，如大腸桿菌和葡萄球菌，是常見的細菌污染。細菌污染很容易找到。當培養(yǎng)的細胞被細菌污染時，培養(yǎng)液將變渾濁并且pH將改變。還有少量的培養(yǎng)液通過肉眼觀察而沒有太大變化，細菌只能在顯微鏡下找到。

如果您正在飼養(yǎng)自己的細胞，建議您每天查看它們。

解：

1）無論什么污染，只要細胞被污染，如果不是非常珍貴的細胞，丟棄并重新培養(yǎng)。

在這里進行再培養(yǎng)時，要注意自己細胞的污染狀況。如果它在傳遞時被污染，則取決于受污染的光盤數(shù)量。如果全部污染，那么所有的東西都被更換，先取出試劑。原因是，等待您停止污染，您可以嘗試使用原始試劑。

如果更換試劑或污染，則需要清潔培養(yǎng)箱和房間;如果是污染之一，可能是你自己操作的原因，下次需要多加注意，

通常，我們只需要在需要使用它們時提高細胞。它很少用于練習(xí)我們的手。因此，污染的一時刻是確保下一個細胞不會污染，然后細胞被提升并慢慢找到原因。

2）如果細胞非常稀少，需要保存珍貴細胞，建議配置含有10倍雙抗體PBS和5倍雙抗體的完整培養(yǎng)基。然后用10倍雙抗體PBS洗滌細胞5-10次。

然后，細胞用5倍雙抗體完全培養(yǎng)洗滌3次以上，培養(yǎng)后每1小時更換一次，zui后培養(yǎng)過夜2倍雙抗體培養(yǎng)基，替換為雙抗生素完全培養(yǎng)基。第二天。培養(yǎng)，傳代兩次以上，如果沒有發(fā)現(xiàn)污染，可將其冷凍，并使一些細胞在沒有抗生素的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)超過48小時，zui后確定細胞不含污染物。

菌：

其中一種常見的污染物是曲霉菌，白色念珠菌，酵母，黑霉病，孢子，并且在雨季更容易受到污染?，F(xiàn)在我們正處于雨季，真菌也來了。

真菌生長相對緩慢，并且在疾病開始時對細胞生長沒有太大影響。先，如果只是觀察細胞，可能會被忽略，但經(jīng)過很長一段時間后，細胞的活力會變差。培養(yǎng)基是透明的，不會改變顏色。其中可以看到白色或淺黃色的浮動物體。在顯微鏡下還有絲狀，管狀，樹枝狀或橢圓形物質(zhì)。念珠菌和酵母菌株呈橢圓形。當你看到明顯的菌絲時。

解：

1）因為霉菌有孢子，所以酒精，清潔和熄滅，紫外線等不可能去除霉菌！上面的一個，不重要，立即處理?；蚺c其他細胞分離，更換所用的實驗室設(shè)備和試劑。

2）zui好防止真菌，用硫酸銅溶液擦拭CO2培養(yǎng)箱，并在水盤中加入飽和量的硫酸銅。

3）將飽和消毒的磷酸氫二鈉高鹽液加入培養(yǎng)箱的托盤中，以防止霉菌污染。

4）應(yīng)定期（1月左右）清潔孵化器，特別是在雨季。

5）為防止霉菌污染，在培養(yǎng)基或放線菌素D或雙抗體中加入3ul / ml兩性霉素或制霉菌素。

6）zui重要的是培養(yǎng)良好的無菌概念，避免將培養(yǎng)基灑入培養(yǎng)箱和生物安全柜。這些培養(yǎng)基灑在培養(yǎng)箱中，為細菌和真菌的繁殖提供了良好的條件。

7）如果被污染，將所有細胞從受污染的CO2培養(yǎng)箱中轉(zhuǎn)移出來并用過氧乙酸（所有，特別是四個角落）清洗培養(yǎng)箱。將過乙酸置于培養(yǎng)箱中1小時以使蒸汽充滿。在過乙酸的氣味消散后，將其轉(zhuǎn)移到細胞中。

8）徹底消毒環(huán)境。整個培養(yǎng)室用福爾馬林和高錳酸鉀熏蒸。用苯酚洗滌培養(yǎng)箱內(nèi)部，包括托盤，密封2天。

9）一旦細胞被污染，就很難保存。即使使用制霉菌素或放線菌素D，它也是一種傷害敵人10,000的方法。高濃度的抗真菌劑對細胞有毒。

如果發(fā)現(xiàn)新的污染，pbs洗幾次細胞，盡可能洗滌細菌，然后用兩性霉素25ug / ml處理12-24小時，改變?nèi)芤汉蟾淖儍尚悦顾?/span>3-5ug / ml，改變每天連續(xù)液體，連續(xù)處理2-3天后，繼代培養(yǎng)后，稍微接種到35mm培養(yǎng)皿中，不含兩性霉素，觀察霉菌是否繼續(xù)生長，剩余的傳代細胞繼續(xù)加入兩性霉素直至不是細胞添加沒有霉菌生存。 。

黑膠蟲：

它可以穿透過濾膜或通過空氣傳播。在低倍率下是黑點。黑蟲可以在高放大倍數(shù)下游泳和游泳。一般來說，它不會影響太多。仍然可以使用細胞。的。通常，細胞生長狀態(tài)良好，觀察到的移動物體沒有顯著增加，并且培養(yǎng)基的顏色和透明度沒有顯著改變，并且在同一批血清培養(yǎng)細胞中可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。它對細胞生長狀態(tài)沒有顯著影響，并且在細胞增殖旺盛后自然消失，除了更換血清外不需要特殊處理。

可能的污染原因：可能有許多原因，如液體消毒，操作問題，環(huán)境問題等。

定期預(yù)防污染：

1，在培養(yǎng)基中加入雙抗體，預(yù)防量可以，10ul / ml。然而，雙抗體會影響細胞的狀態(tài)，因此有必要在轉(zhuǎn)染前去除雙抗體并檢測細胞的某些指標，以避免影響實驗結(jié)果。

2，培養(yǎng)箱應(yīng)定期或紫外線消毒，培養(yǎng)箱應(yīng)用酒精和解結(jié)器進行檢測。培養(yǎng)箱中的水優(yōu)選為三蒸水。

3，超凈平臺物料提取設(shè)備培養(yǎng)液瓶操作必須按規(guī)定操作，不要隨意操作，快速，頻繁地四處走動。

4，超潔凈平臺的風扇不能太大，風扇要6-8格。否則也可能導(dǎo)致霉菌污染

5.無菌室用甲醛熏蒸后，可用相同量的氨水中和，可在約數(shù)小時內(nèi)操作。

6，操作人員個人原因：這是zui可預(yù)防的，在使用設(shè)備之前必須檢查解決方案是否可用，是否過時，如果您是過時的，請不要冒險，請務(wù)必重新消毒或定期治療，特別是有時沒有面罩，手套，并且在操作時大聲說話是zui不合適的。

zui后，小編想說：

細胞污染，預(yù)防是硬道理！ ！ ！不要考慮補救措施，失去兩者并不是一個好主意，zui重要的是預(yù)防！預(yù)防！預(yù)防！ ！ ！