8305C細(xì)胞,細(xì)胞株培養(yǎng)
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胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蚩张?。
細(xì)胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì),表明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。
同樣,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。
產(chǎn)生空泡可能是老化或是細(xì)胞狀態(tài)不好。
如果發(fā)生在單層細(xì)胞:一個(gè)具有雙折射性的正常細(xì)胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細(xì)胞邊緣成暈環(huán)),則提示該細(xì)胞已經(jīng)死亡,即終干枯死亡。
如果發(fā)生在懸浮細(xì)胞:正常懸浮細(xì)胞清晰透明,如胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蜃儨啙岜砻骷?xì)胞受損,甚至死亡。
怎樣去除死細(xì)胞?單層培養(yǎng)的細(xì)胞死亡后,一般會(huì)漂浮起來,因此不需要特殊處理。
而懸浮細(xì)胞或原代培養(yǎng)細(xì)胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細(xì)胞。
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8305C細(xì)胞,細(xì)胞株培養(yǎng)細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。
貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
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