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PCR基因擴(kuò)增儀各類型介紹

發(fā)布時間:2024-08-12瀏覽次數(shù):713返回列表

       PCR技術(shù)的本質(zhì)是核酸擴(kuò)增技術(shù),重復(fù)“變性(denature)→退火(anneal)→引物(primer)延伸(extension)"過程至25-40個循環(huán),呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù),達(dá)到體外擴(kuò)增核酸序列的目的。

 PCR的基本原理:

在PCR技術(shù)的發(fā)展過程中,熱穩(wěn)定DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)以及溫度循環(huán)的自動化大大簡化了PCR程序,使PCR的自動化成為可能,并在此基礎(chǔ)上不斷發(fā)展和改進(jìn)。
PCR基因擴(kuò)增儀的工作原理:
    PCR基因擴(kuò)增儀工作關(guān)鍵是溫度控制。
1.水浴鍋控溫:以不同溫度的水浴鍋串聯(lián)成一個控溫體系。
2.壓縮機(jī)控溫:由壓縮機(jī)自動控溫,金屬導(dǎo)熱,控溫較代PCR基因擴(kuò)增儀方便,但壓縮機(jī)故障率高,邊緣效應(yīng)及溫度overshooting現(xiàn)象嚴(yán)重。
3. 半導(dǎo)體控溫:由半導(dǎo)體自動控溫,金屬導(dǎo)熱,控溫方便,體積小,相對穩(wěn)定性好。
4. 離心式空氣加熱控溫:由金屬線圈加熱,采用空氣作為導(dǎo)熱媒介,溫度均一性好,各孔擴(kuò)增效率高度一致,滿足熒光定量PCR的高要求。
PCR擴(kuò)增儀的分類與結(jié)構(gòu):
    PCR擴(kuò)增儀的種類總體來說,可以分成兩大類,即普通PCR擴(kuò)增儀和實時熒光定量PCR擴(kuò)增儀。
1、 普通PCR擴(kuò)增儀
1).普通PCR擴(kuò)增儀即通常所謂的定性PCR擴(kuò)增儀。
2).梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。
3).原位PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶原位擴(kuò)增功能的基因擴(kuò)增儀。
2、 實時熒光定量PCR擴(kuò)增儀
1.金屬板式實時定量PCR儀,還可作為普通PCR儀使用,有的甚至帶梯度功能,可容納的樣本量大,無需特殊耗材,但溫度均一性欠佳,有邊緣效應(yīng),標(biāo)準(zhǔn)曲線的反應(yīng)條件難以做到與樣品wan全一致。
2.離心式實時定量PCR儀的PCR擴(kuò)增樣品槽被設(shè)計為離心轉(zhuǎn)子,溫度均一性好,但可容納樣品量少,有的需用特殊毛細(xì)管作樣品管,增加了使用成本,也不帶梯度功能。
3.各孔控溫的定量PCR儀的不同樣品槽分別擁有的智能升降溫模塊,各孔控溫,適合多指標(biāo)快速檢測,可實現(xiàn)任意梯度反應(yīng),但上樣不如傳統(tǒng)方法方便,而且需要du特的扁平反應(yīng)管,使用成本較高。


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