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MRS培養(yǎng)基的滅菌方法
發(fā)布時間：2016-10-10瀏覽次數(shù)：2106返回列表
高壓蒸汽滅菌適合于MRS培養(yǎng)基、耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。
MRS培養(yǎng)基、在制備過程中混入各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，至少應(yīng)在24h內(nèi) 完成滅菌工作。滅菌時一般是在1.1kgf/cm2（1kgf/cm2 = 0.098MPa）壓力下， 溫度121℃時，滅菌15-30分鐘即可。
消毒時間不宜過長，也不能超過規(guī)定的壓力范圍，否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分解，失去營養(yǎng)作用，也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難以凝固。
滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3天，以便觀察培養(yǎng)基是否徹底滅菌，這樣能夠使某些因為沒有徹底滅菌的培養(yǎng)基，在接種前被檢出，可避免雜菌污染而造成不必要的損失，這點對少而重要的材料尤其值得注意。但是在同等條件下經(jīng)多次使用無污染后，就沒必要再擺3天后才使用，而是冷卻凝固后就可使用了。
暫時不用的培養(yǎng)基應(yīng)置于10℃下保存。特別是含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基，置于4-5℃的低溫下保存會更好。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完，其他培養(yǎng)基多也不要超過1個月。多數(shù)情況下，應(yīng)在滅菌后3周內(nèi)用完。
使用高壓滅菌鍋要注意一下事項。
1. 使用前應(yīng)仔細閱讀說明書，嚴格按要求操作。
2. 先在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)加水，加水量應(yīng)按照說明書上要求。
3. 不可裝太滿，否則因壓力與溫度不對應(yīng)，造成滅菌不徹底。
4. 記住達到所需壓力的時間，通常滅菌要求1.1kgf/cm2,鍋內(nèi)達121℃，按不同滅菌要求維持壓力15-40分鐘。
5. 不能隨意延長滅菌時間和增加壓力。培養(yǎng)基要求比較嚴格，既要保證滅菌徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，瓊脂在長時間滅菌后凝固力也會下降，以致不凝固。
6. 當冷卻被消毒的溶液時，必須高度注意，如果壓力急劇下降，超過了溫度下降的速率，就會使液體沸騰，從而培養(yǎng)容器中溢出，導(dǎo)致培養(yǎng)基沾污瓶口等造成污染。務(wù)必緩慢放出蒸汽，當壓力逐漸降至零后，才能打開蓋子。
