ELISA試劑盒加樣時(shí)出現(xiàn)氣泡的原因

  通常氣泡都是聚集在ELISA試劑盒酶標(biāo)板的孔周圍，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。很多說明書、教科書上也都提到，加樣時(shí)要避免出現(xiàn)氣泡，這到底是什么原因呢?因?yàn)樵谧鰧?shí)驗(yàn)的過程中，有時(shí)為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產(chǎn)生氣泡，是不是這樣對實(shí)驗(yàn)結(jié)果會后什么影響?

  1.通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。

  2.包被時(shí)有氣泡的話，將導(dǎo)致包被不完全實(shí)際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。

  3.封閉時(shí)有氣泡的話，將導(dǎo)致大量未結(jié)合位點(diǎn)的存在，引起非特異性結(jié)合--本底增高，假陽性。

  4.加樣時(shí)有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽性甚至假陰性。

  5.加二抗時(shí)有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。

  6.加顯色液時(shí)有氣泡的話---顯色不完全。

  7.加終止液時(shí)有氣泡的話(1、不能完全終止反應(yīng) 2、影響酶標(biāo)儀比色，OD值增高)

  8.洗滌時(shí)有氣泡的話，非特異性結(jié)合物不能完全洗去，做無用功。

  避免方法：

  1、加樣時(shí)盡量靠近孔底(不要接觸孔底)，用力均勻，不要過快過猛。

  2、封閉時(shí)一定要加滿孔，

  3、洗滌時(shí)一定要加滿孔(重要)，氣泡會浮上來*終驅(qū)除。手工洗板時(shí)一定要吸干水分并用力拍干。

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