古朵人 (8-OHdG)Elisa試劑盒說明書

  人 (8-OHdG)Elisa試劑盒說明書

  本試劑盒僅供研究使用。

  檢測范圍： 48T

  3ng/L -100 ng/L

  使用目的：

  本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)含量。

  實驗原理

  人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)Elisa試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)水平。用純化的人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)，再與HRP 標(biāo)記的8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)濃度。

  古朵人 (8-OHdG)Elisa試劑盒 試劑盒組成

  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

  2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(200 ng/L) 0.5ml×1 瓶

  3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶

  4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

  5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

  6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

  標(biāo)本要求

  1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  古朵人 (8-OHdG)Elisa試劑盒操作步驟

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

  100 ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  50 ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  25 ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  12.5 ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  6.25 ng/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

  4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同3。

  8. 洗滌：操作同5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

  10 分鐘.

  10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  操作程序總結(jié)：

  計算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

  古朵人 (8-OHdG)Elisa試劑盒注意事項

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  古朵人 (8-OHdG)Elisa試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。