水飽和酚由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要水飽和酚等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括水飽和酚在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：水飽和酚
英文名稱：Water-Saturated Phenol
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN3190
產(chǎn)品規(guī)格：100mL

本品是將重蒸餾酚用水充分飽和而得，pH在7左右。水飽和酚不會(huì)再吸收樣品的水分。本產(chǎn)品可以用于配制TRIzol，也直接用于RNA提取。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存、避光。有效期一年。

疑難解答：
Q：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)為何需要使用飽和酚？
A： 酚跟水有一定程度的互溶，酚水混合液中水相中一般有8-10%的酚，酚相中一般有12%的水，互溶的比例還跟溫度、鹽離子等相關(guān)(比如，65℃時(shí)，水和酚徹底互溶，不再分相)。如果使用未飽和的酚處理樣品，則分相后樣品的體積將減少，所以為了避免樣品的丟失，需要使用沒(méi)有吸水能力的各種飽和酚。

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名稱：柱式白色念球菌RNA提取試劑盒
貨號(hào)：BTN130847
規(guī)格：50次

名稱：一管式病毒RNA提取試劑盒
貨號(hào)：BTN3073
規(guī)格：100次
本試劑盒是專用于血清(血漿)等液體樣品中提取病毒RNA的純化試劑。本產(chǎn)品回收率高,尤其適合于整合到臨床RT-PCR檢測(cè)試劑盒中。且能用于提取其他液體樣品和微量樣品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 回收率達(dá)到90%以上，高于大部分基于離心柱的提取方法。
2. 靈敏度高，RT-PCR檢測(cè)到的zuì終靈敏度可以達(dá)到50-100拷貝/mL(對(duì)HIV和HCV)。
3.一管式操作，不使用離心柱，整個(gè)操作過(guò)程均在室溫下完成。
4. 環(huán)保，不需要使用苯酚和氯f(wàn)ǎng等有毒的有機(jī)溶液。
5.可放量，如果加上病毒離心富集步驟，每管zuì多可以處理樣品1.5mL。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：準(zhǔn)備工作
1. 血漿的抗凝劑必須是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD時(shí)由于所加入ACD會(huì)增加體積，樣品會(huì)被稀釋，得到的病毒滴度會(huì)比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制備血漿的全血在2-25℃放置的時(shí)間不能超過(guò)6小時(shí)，在此時(shí)間內(nèi)，可以室溫800-1600g離心20分鐘，上清即為血漿。
3. 血漿可以在2-8℃或更低溫度下運(yùn)輸，可以在室溫放置一天，2-8℃放置5天，-20℃以下長(zhǎng)期保存。
4. 血漿zuì好按0.6mL/管的量分裝保存，以避免反復(fù)凍融。
5. 實(shí)驗(yàn)前所有試都必須放置在室溫。
6. 實(shí)驗(yàn)當(dāng)天新鮮配制70%的乙醇。

二：病毒提取操作
1. 標(biāo)記1.5-2mL螺旋蓋塑料離心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006)，為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。注意設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
2. 每管(包括正負(fù)對(duì)照管)中加入0.6mL病毒RNA提取試劑盒溶液(需提前融化)。
3.快速震蕩樣品幾秒，再短暫離心，取0.2mL液體樣品加入到已經(jīng)裝有0.6mL病毒RNA提取試劑盒溶液的管中。如果病毒需要富集，可以將1.5mL液體樣品在4℃ 24,000 g冷凍離心60分鐘，移棄1.3mL上清后在取用樣品。
4.在正負(fù)對(duì)照樣品管中分別加正負(fù)對(duì)照樣品。
5.室溫放置10分鐘。此間可以在每個(gè)管上做個(gè)標(biāo)記，以在下步區(qū)別向心面和離心面。
6. 振蕩數(shù)秒后加入0.7mL室溫異丙醇，旋緊蓋后振蕩30秒混勻，把離心管的向心面對(duì)向轉(zhuǎn)頭的中央，13,000-15000g室溫離心至少15分鐘。
7.小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的RNA沉淀(此時(shí)可能看不見(jiàn))。
8. 加入1.0mL室溫70%乙醇，振蕩數(shù)秒后 15000g室溫離心5分鐘。注意：在離心機(jī)中放置離心管時(shí)將其向心面對(duì)向轉(zhuǎn)頭的中央。
9.小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的RNA沉淀(此時(shí)呈膜狀沉淀)。
10. 再短暫離心數(shù)秒，用移液器移棄殘留液體(70%乙醇)，否則它會(huì)影響后續(xù)反應(yīng)。
11. 加入200μl RNase-free水或百奧萊博的1×液相RNase Scavenger(能滅活殘留的RNase，而RNase-free水無(wú)此功能)，用移液槍仔細(xì)吹打離心管管底和管壁離心面的膜狀RNA沉淀，溶液將呈混濁狀,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA，所以不要離心后取上清使用，必須取混合液使用，哪怕很渾濁。
12. 直接取適量用于RT-PCR，如果溶于200μl水,同時(shí)樣品使用量不超過(guò)RT-PCR體系的1/2，不溶物一般不會(huì)影響RT-PCR。剩余樣品可以室溫放置2小時(shí)，也可保存于-80℃保存一個(gè)月。

疑難解答：
Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA或DNA)為何很難？
A：原因一是量少。病毒顆粒中的RNA或DNA是作為遺傳物質(zhì)保存，每個(gè)病毒zuì多只攜帶幾個(gè)拷貝(而一個(gè)細(xì)胞中有上萬(wàn)個(gè)RNA分子)，同時(shí)其長(zhǎng)度也十分有限(是細(xì)胞基因組的萬(wàn)分之一以下)，樣品中病毒數(shù)往往也不是很多，使得樣品中核酸的量幾乎是微乎其微，十分容易丟失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用電泳和測(cè)OD檢測(cè)，只能通過(guò)PCR或RT-PCR檢測(cè)，而病毒RNA往往具有穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步增加了鑒定的難度(即不知道是RNA提取的問(wèn)題還是RT-PCR的問(wèn)題)。
Q：如何判斷是病毒RNA沒(méi)提取出來(lái)還是提取出來(lái)了但沒(méi)有RT-PCR成功？
A：在RT-PCR反應(yīng)中加陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

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