植物RNA柱式提取試劑盒2.0的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，本制品用于科研試驗，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的植物RNA柱式提取試劑盒2.0質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括植物RNA柱式提取試劑盒2.0在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：植物RNA柱式提取試劑盒2.0
英文名稱：Plant RNA Column extraction kit 2.0
產(chǎn)品貨號：BTN90404
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是柱式植物RNA提取試劑盒(BTN71203)與柱式DNA清除劑(BTN90318)整合后得到的升級產(chǎn)品，它解決了提取的植物總RNA中出現(xiàn)基因組DNA污染這一難題，提取的RNA通過PCR驗證不含基因組DNA污染。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作簡單快速，處理一個樣品只需要約十幾分鐘。
2. RNA純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
3. 所提取RNA不含基因組DNA污染(電泳及PCR均檢測不到)。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實驗。
5. 高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。
6. 本試劑盒方法提取不到總RNA中的miRNA。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反應(yīng)液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脫液	10ml

儲存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存(DNase 需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNAhold中的植物組織需用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊)，放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL 65℃預(yù)熱的溶液A(用前需要搖晃混勻)，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮研磨法破碎植物組織，研磨完后加入1mL溶液A，但效果比較差，因為研缽本質(zhì)是二氧化硅，在溶液A存在時會吸附RNA。
3. 將勻漿物或研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實)含有大量水份，勻漿液會多于1mL，轉(zhuǎn)移時也只取1mL。
4.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯fǎng，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
5.室溫12000rpm離心3～5分鐘，兩相間將有約5毫米厚的細(xì)胞破碎物。
6. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μL上清液不取。
7. 加入跟上清液等體積的溶液C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物，屬于正常現(xiàn)象)，千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的混合液(含沉淀物，如果有的話)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 將剩下的一半的混合液(含沉淀物，如果有的話)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但對于在第7步加入溶液C后有沉淀產(chǎn)生的樣品，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL，其他操作不變。
11. 12000rpm室溫離心10秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會抑制后續(xù)反應(yīng)中DNase的活性。
12. 將10μL(10 U)的RNase-free DNase加入到50μL 37℃預(yù)熱的DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成DNase工作液。
13. 將DNase工作液在37℃預(yù)熱1分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的DNA污染。如果DNA沒有徹底降解(可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了DNase的活性)，此步的保溫時間可以適當(dāng)延長到10分鐘或15分鐘。
14. 直接在離心吸附柱中加0.7mL通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。
15. 12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
16. 再加0.3mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
17. 12000rpm室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇(通用洗柱液中的成分)會影響RNA的使用。
18. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入30-50μL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
19. 12000rpm室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品。本產(chǎn)品提供的離心吸附柱吸附力較強(qiáng)，一次洗脫不能全部將膜上RNA洗下，如有必要，可以再加入30-50μL RNA洗脫液一次。
20. 所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要進(jìn)行甲醛變性電泳檢測。如果使用非變性膠電泳，則必須使用RNAload上樣液。千萬不能使用DNA上樣液(因為它一般沒經(jīng)過去RNase處理)。


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名稱：糞便RNA柱式提取試劑盒
貨號：BTN101109
規(guī)格：50次
由于糞便中有機(jī)質(zhì)含量豐富，對RT-PCR等后續(xù)反應(yīng)有大的抑制作用，所以從糞便中提取高純度的RNA一直是十分棘手的問題。本產(chǎn)品是在糞便RNA提取試劑盒基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式糞便RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作比非柱式法更加簡單快速，處理一個樣品只需要約十幾分鐘。
2. 去污染效果好，RNA 純度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實驗。
4. 高于進(jìn)口的柱式糞便RNA提取產(chǎn)品。
5. 試劑無害，環(huán)保。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期兩年。

使用方法：
1.在自備的3-5mL離心管中稱取0.5-1 g 糞便，加入0.5g 玻璃珠和1mL溶液A，蓋緊離心蓋后震蕩器上劇烈震蕩5-10分鐘。注意：如果放置在低溫，溶液A可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
2. 稍微靜置后將上清液(一般呈棕色)轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5mL塑料離心管中。所取上清液不要超過1mL，否則后續(xù)操作沒有足夠空間。
3.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯fǎng，在振蕩器上振蕩30秒混勻。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
4.室溫12000rpm離心3～5分鐘。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入等體積的溶液C，用手上下顛倒或振蕩器振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。
7.室溫12000rpm離心3分鐘，兩相間將有白色膜狀物(蛋白質(zhì))形成。
8. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套入收集管中厚12000rpm室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
9. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，套入收集管中后12000rpm室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
10. 加0.7mL 通用洗柱液，套入收集管中后室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
11. 加0.3mL 通用洗柱液，套入收集管中后室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 將離心吸附柱套入收集管中后室溫離心半分鐘，棄含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
13. 將離心吸附柱套入到一個自備的RNase-free 收集管中，加入30-100μL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
14. 12000rpm室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
17. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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