固定包埋組織RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的固定包埋組織RNA提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括固定包埋組織RNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：固定包埋組織RNA提取試劑盒
英文名稱：RNA rapid extraction From fixed and embedding tissue
產(chǎn)品貨號：ALH043
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒適用于從福爾馬林固定、石蠟包埋組織樣品中提取總RNA。獨(dú)特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞釋放出RNA，然后裂解混合物通過一個基因組DNA清除柱，基因組DNA被清除而RNA穿透濾過。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， zuì后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。得到的RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組分：

裂解液PKD	15ml
結(jié)合液RBC	25ml
漂洗液RW	10ml
蛋白酶K *（可選）40mg/ml	20mg
RNase-free H2O	10ml
基因組DNA清除柱和收集管	50套
RNA 吸附柱 和收集管	50套

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯fǎng等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2.快速，簡捷，單個樣品RNA提取操作一般可在1小時內(nèi)完成。
3.試劑盒的獨(dú)特基因組清除柱和配方確保有效清除基因組DNA殘留，一般情況下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。
4.多次柱漂洗確保RNA高純度，可直接用于下游各種實(shí)驗(yàn)。

注意事項：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 樣品處理量不要超過基因組DNA清除柱和RNA吸附柱處理能力，否則造成DNA殘留或者產(chǎn)量降低。不同組織細(xì)胞種類RNA/DNA相差大，例如胸腺脾臟DNA含量豐富，超過5mg就會超過柱子處理能力。COS細(xì)胞RNA含量豐富，超過3x106細(xì)胞就會超過柱子吸附能力。所以開始摸索實(shí)驗(yàn)條件時，如果不清楚樣品DNA/RNA含量時寧可使用較少的樣品處理量，如不超過2個10μm厚度石蠟切片。將來根據(jù)樣品試驗(yàn)情況增加或者減少處理量。
3. 裂解液PKD、結(jié)合液RBC中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 預(yù)防RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1) 經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase 污染。
2) 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3) RNA提取過程中應(yīng)使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液應(yīng)使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC 至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
5. 關(guān)于DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留（DNase 消化也無法做到無殘留），本固定包埋組織RNA快速提取試劑盒，由于采取了本公司獨(dú)特的緩沖體系和基因組DNA 清除柱技術(shù)，大多數(shù)DNA 已經(jīng)被清除，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR 和熒光定量PCR。個別特殊情況如DNA 含量過于豐富造成殘留或者要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA 表達(dá)量分析熒光定量PCR，我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時：
1) 選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA 中的連接區(qū),這樣DNA 就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
2) 選擇基因組DNA 和cDNA 上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。
6. RNA 純度及濃度檢測：
完整性： RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE 電泳緩沖液；150v，15 分鐘)檢測完整性。由于石蠟包埋組織福爾馬林固定和包埋過程中一般由于RNA 與蛋白反應(yīng)交聯(lián)會導(dǎo)致RNA 斷裂或者降解，一般電泳后UV 下只能看到模糊彌散（smear）帶型，隨著儲存的時間越長，降解斷裂越嚴(yán)重，甚至只能看到峰值僅僅在100bp 左右的模糊條帶。這都屬于RNA 提取正常情況。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的參考指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA 不純。
濃度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀釋n 倍，用RNase-free 水將分光光度計調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD260, OD280 測定，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。

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BTN51102 細(xì)菌RNA提取試劑盒 100次
BTN100804 氯fǎng-異戊醇混合溶液 250mL
BTN81209 去離子水 250mL
WE0196 固定組織RNA提取試劑盒 50次
ALH071 血液miRNA提取試劑盒 50次
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ALH059 核酸助沉劑 1ml|5ml
RFT034 RNA提取試劑 100ml
SY0266 RNase抑制劑(鼠源) 2KU|10KU|20KU|100KU

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名稱：糞便RNA柱式提取試劑盒
貨號：BTN101109
規(guī)格：50次
由于糞便中有機(jī)質(zhì)含量豐富，對RT-PCR等后續(xù)反應(yīng)有大的抑制作用，所以從糞便中提取高純度的RNA一直是十分棘手的問題。本產(chǎn)品是在糞便RNA提取試劑盒基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式糞便RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作比非柱式法更加簡單快速，處理一個樣品只需要約十幾分鐘。
2. 去污染效果好，RNA 純度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。
4. 高于進(jìn)口的柱式糞便RNA提取產(chǎn)品。
5. 試劑無害，環(huán)保。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期兩年。

使用方法：
1.在自備的3-5mL離心管中稱取0.5-1 g 糞便，加入0.5g 玻璃珠和1mL溶液A，蓋緊離心蓋后震蕩器上劇烈震蕩5-10分鐘。注意：如果放置在低溫，溶液A可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
2. 稍微靜置后將上清液(一般呈棕色)轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5mL塑料離心管中。所取上清液不要超過1mL，否則后續(xù)操作沒有足夠空間。
3.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯fǎng，在振蕩器上振蕩30秒混勻。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
4.室溫12000rpm離心3～5分鐘。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入等體積的溶液C，用手上下顛倒或振蕩器振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。
7.室溫12000rpm離心3分鐘，兩相間將有白色膜狀物(蛋白質(zhì))形成。
8. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套入收集管中厚12000rpm室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
9. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，套入收集管中后12000rpm室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
10. 加0.7mL 通用洗柱液，套入收集管中后室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
11. 加0.3mL 通用洗柱液，套入收集管中后室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 將離心吸附柱套入收集管中后室溫離心半分鐘，棄含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
13. 將離心吸附柱套入到一個自備的RNase-free 收集管中，加入30-100μL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
14. 12000rpm室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
17. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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