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產(chǎn)品詳情

SYA391 禽腺病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒

  • 產(chǎn)品/服務(wù):SYA391 禽腺病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
  • 型 號(hào):SYA391
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價(jià):面議 
  • 更新日期:2023-06-29
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數(shù):1063
產(chǎn)品簡介

禽腺病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持,本品用于科研目的,我公司的禽腺病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒品質(zhì)上佳,經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn),已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

特別提示:包括禽腺病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!


產(chǎn)品名稱:禽腺病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):SYA391
產(chǎn)品規(guī)格:48次/盒

一、簡介:
本試劑盒用一對(duì)禽腺病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)禽腺病毒DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染動(dòng)物的病原學(xué)診斷。

二、用途:
該試劑盒適合于檢測(cè)呼吸道分泌物棉拭子(感染I群禽腺病毒的雞、火雞、鵝、鵪鶉)、卵巢、輸卵管、卵泡、子宮和輸卵管粘膜組織、泄殖腔拭子(感染II、III群禽腺病毒的雞、鴨)等樣本中的禽腺病毒(AADV),用于禽腺病毒(AADV)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成:(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
AADV反應(yīng)液(AADV-qPCR MIX) 1管 720μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
AADV陽性對(duì)照(AADVPTC) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期:
本試劑盒于-20℃以下保存,有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
病死禽取卵巢、輸卵管、卵泡、子宮和輸卵管粘膜組織;活雞取呼吸道拭子或泄殖腔拭子,放于1ml 50%甘油生理鹽水中。
6.2 樣品前處理
組織樣品:每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;泄殖腔拭子直接取100μL提取。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
6.31 純培養(yǎng)物:取培養(yǎng)物50μL與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.3.2 糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,取50μL樣品,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.3.3 組織研磨液、拭子、血清、血漿及其他液體標(biāo)本:取處理好的標(biāo)本50μL,加入50μl DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 注:陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(AADV-qPCR MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15μL N×15μL
計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(AADV-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸時(shí)收集熒光信號(hào) 。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX 參比熒光。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC): 不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2) 陽性對(duì)照(AADV-PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3) 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足 ,否則,此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,表明AADV核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明AADV核酸陰性。
(3) 如果Ct值>35,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對(duì)于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行AADV 檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽性,表明AADV核酸陽性;否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng):
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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