小反芻獸疫病毒(PPRV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒是高品質(zhì)的動(dòng)物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研試驗(yàn)，我公司專注于動(dòng)物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的小反芻獸疫病毒(PPRV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

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產(chǎn)品名稱：小反芻獸疫病毒(PPRV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA504
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒



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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
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名稱：新城疫病毒(NDV)通用型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號(hào)：SYA344
規(guī)格：48次/盒|96次/盒
一、簡介：
新城疫病毒實(shí)時(shí)熒光qRT-PCR檢測試劑是按照美國農(nóng)業(yè)部(USDA)的檢測標(biāo)準(zhǔn)而制備的商業(yè)化檢測試劑盒。本試劑盒為中的探針報(bào)告基團(tuán)為6-FAM，淬滅基團(tuán)為MGB。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細(xì)胞培養(yǎng)液等。可用于新城疫毒株感染的輔助診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成：(50T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
熒光qRT-PCR反應(yīng)液(NDV-qRT-PCR MIX) 1管 700μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1 管 50μL/管
陽性對(duì)照(NDV-PTC) 1 管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標(biāo)準(zhǔn)《新城疫診斷技術(shù)》(GB/T 16550-2008)和《新城疫檢疫技術(shù)規(guī)范》(SN/T 0764-2011)進(jìn)行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
（1） 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管，做好標(biāo)識(shí)。
（2） 每管加入600 μL裂解液，分別加入被檢樣本200 μL，再加入200 μL氯fǎng，混勻器上振蕩混勻5 s，于4℃ 12000r 離心15 min。
（3） 取無RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管，加入-20℃預(yù)冷400μL異丙醇，吸取步驟(2)各管中的上清液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的管中，避免吸出中間層，顛倒混勻。
（4） 于4℃ 12000 r離心15min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體；加入600μL 75％預(yù)冷乙醇，洗滌。
（5） 于4℃ 12000 r離心10min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體。室溫干燥5 min～10 min。
（6） 加入10μL無核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r離心5 s，冰上保存?zhèn)溆?。若需長期保存須放置-70℃冰箱。
 注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應(yīng)液(NDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 19 μL N×19 μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 20 μL N×20 μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入20μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(NDV -PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 5 min
預(yù)變性 1循環(huán) 94℃ for 30 sec
PCR 擴(kuò)增 40循環(huán) 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃ 延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽性對(duì)照(NDV-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明NDV核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明NDV核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對(duì)于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行NDV qRT-PCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明NDV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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