細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒是利用E02熒光進行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色的試劑盒。該探針具有細胞膜透過性，對活細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針，該探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對細胞幾乎無毒性。...

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(綠色熒光)

 

產(chǎn)品編號：HR7813

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

染料-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。有效期6個月。

【注】：

● 染料短期2-8℃保存，長期不用可以-20℃保存。避免反復(fù)凍融。

● 探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(綠色熒光)產(chǎn)品簡介：

細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒是利用E02熒光進行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色的試劑盒。

該探針具有細胞膜透過性，對活細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針，該探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對細胞幾乎無毒性。

該探針高度結(jié)合ATP-敏感型K+通道的磺脲類受體，該受體富集存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，因此該探針適合用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針，E02最大激發(fā)波長為483nm，最大發(fā)射波長為500nm。

檢測方法：

● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 流式細胞儀

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機 ● PBS ● 或者HBSS（無酚紅）

注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● E02染色探針液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 標記的條件因細胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。

● 染色后立即進行分析。

● 本染色液可用于細胞涂片、細胞的檢測。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(綠色熒光)使用方法：

1、染色工作液配制：

根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預(yù)熱HBSS或PBS或其他緩沖液將E02熒光染料500-1000倍稀釋。配制成染色工作液。

【注】：

● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 以下實驗方案經(jīng)牛肺動脈內(nèi)皮細胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細胞系驗證。但不同細胞類型其最佳使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進行進一步優(yōu)化染色濃度和時間。

2、細胞染色

懸浮細胞染色

1) 用HBSS洗滌細胞2次。

【注】：

● 500×g離心5分鐘。

2) 加入適量體積的預(yù)熱的染色工作液重懸細胞。

3) 在37℃孵育細胞5～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4) 孵育結(jié)束，500×g離心2分鐘。

5) 移除上清液，加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細胞。

6) 在激光共聚焦顯微鏡觀察細胞。

貼壁細胞染色

1) 用HBSS洗滌細胞2次。

2) 細胞培養(yǎng)板中或細胞爬片上加入適量體積的預(yù)熱染色工作液。

【注】：

● 96孔細胞培養(yǎng)板每孔加入200μL染色液。

3) 37℃孵育細胞5～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4) 吸干染色工作液，加入新鮮培養(yǎng)基。

5) 在激光共聚焦顯微鏡觀察細胞。

3、用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡檢測。

激發(fā)波長為488nm，最大發(fā)射波長為500nm。

常見問題分析：

● 可以對細胞進行固定嗎？

已染色細胞用固定后，僅部分熒光探針留在細胞內(nèi)，熒光信號會有部分衰減。

● 固定細胞的方法？

用4%甲醛于37℃固定細胞2min。細胞固定后，可用合適緩沖液進行清洗，每次5min，共2 次。清洗后可對細胞進行后續(xù)封片、鏡檢或進一步染色。

● 可以對細胞進行透化處理嗎？

不建議對細胞進行透化處理，因為經(jīng)Triton X-100或其它透化劑透化后，細胞內(nèi)將無熒光信號保留。

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