內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒(低速離心法)只需要達到20000×g以內(nèi)的離心力即可提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，一般的常規(guī)臺式離心機均可以滿足使用要求。本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的提取。...

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒(低速離心法)

 

產(chǎn)品編號：HR9087

產(chǎn)品組成：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒(低速離心法)儲存條件：

2-8℃保存，有效期1年。

產(chǎn)品簡介：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為由生物膜構(gòu)成的互相通連的片層隙狀或小管狀系統(tǒng)，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質(zhì)之間不直接相通。這種細胞內(nèi)的膜性管道系統(tǒng)一方面構(gòu)成細胞內(nèi)物質(zhì)運輸?shù)耐?，另方面為細胞?nèi)各種各樣的酶反應提供廣闊的反應面積。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能與蛋白質(zhì)的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關(guān)，并且還具有運輸?shù)鞍踪|(zhì)的功能。

傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取方法需要采用較高的離心力或者采用密度梯度離心，對實驗室離心機設(shè)備要求較高，對實驗的操作細致程度要求較高。如果實驗室沒有能達到50000×g以上的離心力的設(shè)備，則沒法進行提取。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒(低速離心法)只需要達到20000×g以內(nèi)的離心力即可提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，一般的常規(guī)臺式離心機均可以滿足使用要求。

本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的提取。

試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)回收率會下降。

使用方法：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒(低速離心法)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取：

1、取1～2×10⁷個細胞，在4℃，500×條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞；

2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3、加入500μL冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4、用Dounce勻漿器勻漿充分勻漿，然后在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6、將上清在4℃，11000×g力條件下離心10分鐘。

7、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8、將上清在4℃，12000-16000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL試劑B，充分混勻。

【注】：

● 試劑B 使用前請充分混勻。

10、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

11、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。

組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提?。?

1、取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2、用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。

3、加入500μL冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4、用Dounce勻漿器充分勻漿30-40下，至無明顯固體團塊。然后4℃,1000×g力條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6、在4℃，11000×g力條件下離心10分鐘。

7、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8、將上清在4℃，12000-16000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL試劑B，充分混勻。

【注】：

● 試劑B使用前請充分混勻。

10、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

11、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。

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