該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白用于二維電泳。如需要用于報告基因檢測、SDS-PAGE 電泳檢測、Western blotting、凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活分析等下游實驗的試劑盒，請聯(lián)系本公司，選擇其他貨號產(chǎn)品。...

絲狀真菌蛋白提取試劑盒(2D電泳用)

 

產(chǎn)品編號：HR0197

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋前也可以2-8℃保存，開蓋使用后-20℃保存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

產(chǎn)品簡介：

絲狀真菌蛋白提取試劑盒（2D電泳用）適用于從各種絲狀真菌中提取總蛋白。優(yōu)化的裂解液配方可以充分釋放各種有隔膜菌絲和無隔膜菌絲蛋白以及各種菌絲變態(tài)體蛋白，提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。

該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白用于二維電泳。如需要用于報告基因檢測、SDS-PAGE 電泳檢測、Western blotting、凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活分析等下游實驗的試劑盒，請聯(lián)系本公司，選擇其他貨號產(chǎn)品。

絲狀真菌蛋白提取試劑盒(2D電泳用)試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 移液器 ● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 勻漿機(jī)/勻漿器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、提取液制備：

每500μL絲狀真菌蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取培養(yǎng)絲狀真菌，在4℃，3000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集菌體。

3、用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、將菌體置于研缽中用液氮研磨15分鐘左右至粉末。

【注】：

● 若無液氮研磨條件，可直接用蛋白提取液研磨。

● 或者加入蛋白提取液后用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿處理。

5、研磨后，每100mg菌體中加入300-500μL蛋白提取液，混勻后，置離心管中在4℃條件下振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

● 細(xì)胞壁較厚的樣本需要進(jìn)一步延長振蕩時間。

6、在14000×g條件下離心15分鐘。

7、快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到真菌總蛋白。

8、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

絲狀真菌蛋白提取試劑盒(2D電泳用)常見問題分析：

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 蛋白濃度低？

處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

試劑A用量可以根據(jù)情況進(jìn)行調(diào)整，樣本較小時減少試劑A每次用量。

● 提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？

蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物,屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10秒間隔10秒,超聲3分鐘,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,不必進(jìn)行超聲處理。

如果您覺得“HR0197 絲狀真菌蛋白提取試劑盒(2D電泳用)”描述資料不夠齊全，請聯(lián)系我們獲取詳細(xì)資料。(聯(lián)系時請告訴我從給覽網(wǎng)看到的，我們將給您最大優(yōu)惠！)
本頁鏈接：http://mingjiewl.com/com_bjbiolab/sell/itemid-9458963.html
已經(jīng)有1055位訪客查看了本頁.