細胞的生長、發(fā)育、分化及代謝狀態(tài)和外界細胞因子、炎癥介質(zhì)反應(yīng)等均可以影響細胞粘附，細胞粘附也可能是腫瘤細胞易發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)。細胞粘附檢測試劑盒含全套試劑，通過活細胞染色探針W16染色粘附的活細胞數(shù)量來反應(yīng)細胞的粘附能力變化。...

細胞粘附檢測試劑盒

 

產(chǎn)品編號：HR8260

產(chǎn)品組成：

細胞粘附檢測試劑盒儲存條件：

2-8℃保存；染色液開蓋后2-8℃避光保存，長期不用-20℃避光保存。有效期1年。

產(chǎn)品簡介：

細胞粘附是指細胞與細胞之間及細胞與細胞外基質(zhì)之間的粘附，細胞粘附是細胞維持形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的生物現(xiàn)象，是細胞間信息交流的一種形式。而信息交流的可溶遞質(zhì)稱細胞粘附分子(cell adhesion molecule,CAM)。細胞粘附分子是參與細胞與細胞之間及細胞與細胞外基質(zhì)之間相互作用的分子。 是一類獨立的分子結(jié)構(gòu)，是通過識別與其粘附的特異性受體而發(fā)生相互間的粘附現(xiàn)象。

細胞的生長、發(fā)育、分化及代謝狀態(tài)和外界細胞因子、炎癥介質(zhì)反應(yīng)等均可以影響細胞粘附，細胞粘附也可能是腫瘤細胞易發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)。

細胞粘附檢測試劑盒含全套試劑，通過活細胞染色探針W16染色粘附的活細胞數(shù)量來反應(yīng)細胞的粘附能力變化。

本試劑盒不含有包被液。本試劑盒使用比色法進行檢測，如果需要熒光法檢測的，請選用我公司貨號為HR8258的試劑盒。

本試劑盒適合進行常規(guī)的總體粘附性能的檢測。不含有包被劑，如果需要含包被劑的，可以選用我公司貨號為HR0957的試劑盒。

產(chǎn)品特點：

● 方便：可用酶標(biāo)儀檢測；

● 快速：最快1小時內(nèi)即可完成實驗；

● 靈敏：數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好，線性范圍更寬；

● 準(zhǔn)確：試劑本身穩(wěn)定性高，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 酶標(biāo)儀 ● 離心機 ● 移液器 ● Matrigel/Fibronectin,Fn ● PBS或者HBSS

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導(dǎo)致試劑量不夠用。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。

● 染色培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養(yǎng)時間。培養(yǎng)時間一般為1-4小時，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據(jù)細胞種類而定，需要摸索一下條件)。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔(100μL培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔(100μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入染色液B。

● 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加染色液B試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾O.D值讀數(shù)。

● OD值在0.4-2.0之間均可，最大值控制在1.0左右為宜，小于0.4或大于2.0請調(diào)整接種量和培養(yǎng)時間。

細胞粘附檢測試劑盒使用方法：

包被：

1、根據(jù)細胞類型，96孔板每孔加入100μL Matrigel或Fibronectin包被液。

2、將培養(yǎng)板置2-8℃過夜。

3、移除包被液。

4、用洗滌液洗滌1-3次。

細胞接種：

1、待測定細胞處理好后，用胰酶消化，PBS洗滌，然后用相應(yīng)培養(yǎng)基重懸，制成細胞懸液。

2、按5×10⁴細胞/孔接種96孔板，建議設(shè)3-5個復(fù)孔。同時設(shè)立對照組，即孵育后不棄上清組。

3、放37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘-1小時。

4、取出培養(yǎng)板，吸棄培養(yǎng)基。

【注】：

● 對照孔培養(yǎng)基不要吸除。

5、然后用相應(yīng)的培養(yǎng)基洗滌2-3次。

6、每孔加入100μL新鮮培養(yǎng)基。

粘附率檢測：

1、96孔板每孔加入10μL細胞染色液B。

2、37℃孵育30分鐘-4小時。

【注】：

● 不同細胞需要孵育的時間差異較大，需要摸索最佳孵育時間，一般孵育30分鐘后拿出培養(yǎng)板檢測對照細胞孔的450nm 的OD值，達到0.8-1.0即可。

3、測定樣品孔OD值。測定450 nm 各孔的吸光值，如無450nm濾光片，可以使用450-490nm的濾光片。

4、細胞粘附率計算。

將各測試孔的OD值減去空白孔(未加細胞孔)OD值。各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。

細胞粘附率% =((待測細胞OD-空白OD)/(對照細胞OD-空白OD))×100

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