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產(chǎn)品詳情

SYA179 冠狀病毒單重熒光PCR檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品/服務:SYA179 冠狀病毒單重熒光PCR檢測試劑盒
  • 型 號:SYA179
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價:面議 
  • 更新日期:2023-06-05
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數(shù):1098
產(chǎn)品簡介

北京百奧萊博供應的冠狀病毒單重熒光PCR檢測試劑盒用于科學研究,我公司的冠狀病毒單重熒光PCR檢測試劑盒品質(zhì)上佳,經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn),已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...

產(chǎn)品詳細介紹

特別提示:包括冠狀病毒(SARS)單重熒光PCR檢測試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!


產(chǎn)品名稱:冠狀病毒(SARS)單重熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:SYA179
產(chǎn)品規(guī)格:48次/盒



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簡介
本試劑盒用一對尼帕病毒特異性引物,結(jié)合特異性熒光探針,用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對尼帕病毒 RNA進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。本試劑盒中尼帕病毒的探針報告基團為FAM。

二、用途:
本試劑盒適用于檢測疑似感染病人的靜脈血等標本中的尼帕病毒RNA??捎糜谀崤敛《靖腥镜妮o助診斷、監(jiān)測及流行病學調(diào)查,其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成:(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
尼帕病毒熒光qRT-PCR反應液(NIPAH-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對照(NIPAH-PTC) 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期:
本試劑盒于-20℃以下保存,有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標準采集。標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-80℃,但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。
6.1.1 血清:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,注入無菌的干燥玻璃管,室溫(22-25℃)放置30-60min,血標本可自發(fā)完成凝集析出血清,或直接使用水平離心機,3000rpm離心5min,吸取上層血清,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管,立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次,使抗凝劑與靜脈血充分混勻,5-10min后即可分離出血漿,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品:在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水,劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無RNA酶污染的離心管中,6000rpm離心20s,取上清備用。
6.1.4 病灶組織樣品:稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物,然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液于1.5mL滅菌離心管中。
6.2 RNA提取
可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應試劑盒說明進行操作。
 注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟:
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應液(NIPAH-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1μL N×1μL
總量 15 μL N×15μL
計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(NIPAH-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 10 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM,淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析:
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1) 陰性對照(NTC):不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
(2) 陽性對照(NIPAH-PTC):均產(chǎn)生擴增曲線。
(3) 以上條件應同時滿足,否則,此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽性,表明NIPAH核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明NIPAH核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對于可疑樣品,先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進行NIPAH qRT-PCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線,判為樣本陽性,表明NIPAH核酸陽性;否則判為樣本陰性。

九、注意事項:
(1) 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌,而且必須不含RNA酶。
(3) PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等),防止實驗室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。


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